Меню Рубрики

Гост определение левомицетина в молоке

Текст ГОСТ 32219-2013 Молоко и молочные продукты. Иммунологические методы определения наличия антибиотиков

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ, МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION, METROLOGY AND CERTIFICATION

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ ло межгосударственной стан* дартизации установлены ГОСТ 1.0—92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные по* ложекия» и ГОСТ 1.2—2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосудар* ственные. правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены»

1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности» Российской академии сельскохозяйственных наук» (ГНУ 8НИМИ Россельхозакадемии)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (про* токол от 14 ноября 2013 г. N9 44)

За принятие проголосовали:

Краткое маиыеноеание страны по МК (ИСО 3166) 004—97

Кол страны по МК ГИСО 3106)004—97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Минэкономики Республики Армения

Госстандарт Республики Беларусь

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноя* бря 2013 г. N9 1920-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32219—2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

5 Настоящий стандарт разработан с учетом основных нормативных положений международного стандарта ISO 18330:2003 «Молоко и молочные продукты. Руководящие указания ло стандартизованному описанию иммунологических или рецепторных анализов для определения антибактериальных остатков» («Milk and milk products — Guidelines for the standardized description of immunoassays or recep* tor assays for the detection of antimicrobial residues», NEO)

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется е ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и попраеок — е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано е ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сета Интернет

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ Иммумоферментные методы определения наличия антибиотиков

Immunoenzyme methods for determination of antibiotics

Настоящий стандарт распространяется на сырое, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое коровье молоко (далее — молоко) и устанавливает качественные иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков:

• методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа;

• методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетради-клиновой группы;

• метод одновременного определения лееомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина;

— методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрацикли-новой группы, лееомицетина и стрептомицина.

8 настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты;

ГОСТ 3145—64 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия

ГОСТ 6709—72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026—76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 16317—67 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 28498—90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы определений

ГОСТ 29227—91 (ИСО 835-1—61) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссыгкдоых стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю «[Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя «Национальные стандарты» за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Оборудование, средства измерений, посуда, материалы и реактивы

3.1 Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 37 °С до 66 *С с допустимой погрешностью ± 0.5 «С.

3.2 Баня водяная с терморегулятором, поддерживающая температуру от 37 *С до 66 *С.

З.ЗХолодильникбытовой. позволяющий поддерживать температуру отО*С до 12 в СпоГОСТ 16317.

3.4 Камера морозильная, позволяющая поддерживать температуру минус (20 ± 2) *С.

3.5 Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.

3.6 Термометр лабораторный стеклянный с диапазоном измерения от 0 в С до 100 *С ценой деле* ния шкалы 1*С по ГОСТ 28498.

3.7 Пипетки вместимостью 0.5 и 1.0 см 3 * * * 7 по ГОСТ 29227.

3.8 Бода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.9 Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

3.10 Тест-наборы для определения наличия антибиотиков:

*тест*на6ор Nv 1 1 ) для определения антибиотиков бета-лактамного типа, включающий закрытые крышкой пробирки с 3,3’.5,5’*тетраметилбензидином и специфическими рецепторами: пипетки вместимостью 0.45 см 3 : индикаторное устройство с диметилсульфоксидом:

• тест-набор N9 2 2 > для определения антибиотиков бета-лактамного типа, включающий флаконы с лиофилизатом, индикаторные полоски хроматографической бумаги, пипетки вместимостью 0.15 см 3 ;

• тест-набор № З 3) для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетра-циклиновой группы, включающий пеналы с пластинами микропробирок со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторными полосками хроматографической бумаги: пипетками вместимостью 0.2 см 3 с наконечниками; контрольные растворы: пробирки или флаконы со смесью сухого молока с массовой концентрацией пекициллина-G 0.004 мкг/г и окситетрациклина 0.01 мкг/г. красителя («Positive Standard»); пробирки и флаконы со смесью сухого молока без антибиотиков и красителя («Negative Standard»);

• тест-набор № 4 J ) для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетра* циклиновой группы в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору № 1;

-тест-набор No 5 5> для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и те-трациклиновой группы, включающий закрытые крышкой флаконы со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторные полоски хроматографической бумаги: пипетку вместимостью 0.2 см 3 с наконечниками:

-тест-набор N9 6 е ) для одновременного определения левомицетина и стрептомицина, включающий флаконы: индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетки вместимостью 0.2 см 3 ;

-тест-набор N9 7 ?> для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетра-циклиновой группы, левомицетина и стрептомицина в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N9 3:

• тест-набор N9 8 в> для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетра-циклиновой группы, левомицетина и стрептомицина в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N9 6.

Допускается использование другого оборудования с техническими характеристиками и средств измерений с метрологическими характеристиками, а также материалов, реактивов и посуды по качеству не ниже вышеуказанных.

Отбор проб молока — по нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт. Пробы допускается хранить в холодильнике при температуре (4 ± 2) *С не более 24 ч.

^ Тест-набор «СНАП Бета-Пактам СТ».

3 ) Тест-набор «Twinsensor® 3 ».

Тест-набор «СНАП Дуо Бета-Твтра СТ».

5) Тест-набор «Betastar Combo HS».

Тест-набор «Reveal for САР/STREP»

7 ) Тест-набор «4sensor BTCS ».

Сноски 1)—8) с указанными тест-наборами являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что стандарт устанавливает их обязательное применение. Допускаются к использованию тест-наборы производства других изготовителей, обеспечивающие требования настоящего стандарта. В этом случае следует руководствоваться инструкциями, прилагаемыми к данным тест-наборам.

5 Методы определения наличия антибиотиков

5.1 Методы определения наличия антибиотиков бота-лактамкого типа

5.1.1 Метод с использованием тест-набора Ns 1

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом с индикатором, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков устанавливают визуально, сравнивая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков с интенсивностью цвета контрольной зоны индикаторного устройства.

5.1.1.1 Подготовка к определению

Тест-набор No 1 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2 Хдо 8 X. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15 X до 30 X в течение 5 мин.

Анализируемое молоко хранят в холодильнике при температуре от О X до 10 X.

Вскрывают упаковку тест-набора и проверяют положение шарика реактива в пробирке, который должен находиться на дне. При необходимости шарик реактива устанавливают на дно пробирки встряхиванием.

5.1.1.2 Проведение определения

Снимают крышку с пробирки. Пипетку вместимостью 0.45 см 3 наполняют анализируемым молоком до метки и выливают в пробирку. Пробирку закрывают крышкой и перемешивают круговыми движениями до растворения реактива.

Индикаторное устройство устанавливают на горизонтальной поверхности так. чтобы приемная воронка для заливания анализируемой смеси находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.

8 момент начала изменения цвета активационного окна клавишу индикаторного устройства нажимают до щелчка. Через 6 мин считывают результат. Стабильность окраски сохраняется в течение 30 мин.

5.1.1.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность окрашенных в синий цвет зон в окнах индикаторного устройства в соответствии с А.1 (приложение А).

Если после проведения определения по 5.1.1.2 изменения цвета контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.1.2 Метод с использованием тест-набора Ns 2

Метод основан на реакции комплексообраэования антибиотиков бета-лактамного типа с белковыми рецепторами, содержащимися в лиофилиэате, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги. содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.

5.1.2.1 Подготовка копределению

Тест-набор No 2 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре (612) X не более 9 мес. Перед началом работы необходимое количество флаконов извлекают из тест-набора, выдерживают при температуре от 15 X до 30 X. после чего открывают, удаляя фольгу.

Термостат или водяную баню нагревают до температуры (64 ± 2) в С.

5.1.2.2 Проведение определения

Пипетку вместимостью 0,15 см 3 наполняют анализируемым молоком, выливают во флакон и перемешивают круговыми движениями.

Флакон помещают в термостат или на водяную баню и выдерживают при температуре (64 ± 2) X в течение 2 мин. После этого флакон достают из термостата (водяной бани), перемешивают круговыми движениями до растворения реактива и помещают обратно.

Во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают в течение 3 мин. По истечении времени индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат.

5.1.2.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.2 (приложение А).

Зона в верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.1.2.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.

Большая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.2 Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и

5.2.1 Метод с использованием тест-набора № 3

Метод основан на реакции комплексообраэования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

Метод распространяется на молоко и сыворотку, в том числе сухую.

5.2.1.1 Подготовка к определению

Тест-набор № 3 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2®С до 8 *С не более 12 мес. Перед началом работы необходимое количество пеналов из тест-набора выдерживают при температуре от 15 *С до 30 *С.

Термостат или водяную баню нагревают до температуры (40 ± 3) *С и выдерживают при этой температуре не менее 5 мин.

Восстановление контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard»

В стеклянные пробирки с контрольными растворами пипеткой вносят по 1 см 3 дистиллированной воды (0.4 см 3 для контрольных растворов в пластиковых флаконах) и перемешивают до образования однородного раствора.

Срок хранения восстановленных контрольных растворов в морозильной камере при температуре минус 20 *С — не более 6 мес. Не допускается повторное замораживание восстановленных контрольных растворов.

5.2.1.2 Проведение определения

Микропробирки извлекают из пенала и помещают в термостат или на водяную баню с температурой (40 ± 3) ®С. 8 каждую микропробирку пипеткой с наконечником вносят 0.2 см 3 анализируемого молока, перемешивают, наполняя и сливая содержимое с помощью пипетки пять раз для получения однородного раствора, и выдерживают в термостате (на водяной бане) в течение 3 мин.

Для каждой микролунки используют новый наконечник на пипетку.

Индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из пенала, помещают в микропробирки и выдерживают в термостате (на водяной бане) при температуре (40 ± 3) *С в течение 3 мин. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из микропробирок и считывают результат.

Определение с использованием контрольных растворов проводят, как указано выше, при этом в одну микропробирку пипеткой с наконечником вносят 0.2 см 3 раствора «Positive Standard», в другую — 0.2 см 3 раствора «Negative Standard».

5.2.1.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторной

полоске хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.З (приложение А).

Зона центральной части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контроль* ной. Если после проведения определения по 5.2.1.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест*набором.

Зона определения антибиотиков тетрацикпиновой группы на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков бета-лактам-кого типа — под контрольной зоной.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

При проведении определений с применением контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard» обработку результатов проводят, как указано выше.

5.2.2 Метод с использованием тест-набора Ns 4

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета*лактамного типа и тетрацикпиновой группы захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом с индикатором, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков устанавливают визуально, сравнивая интенсивность цвета зон определения антибиотиков с интенсивностью цвета контрольной зоны индикаторного устройства.

Читайте также:  Плавниковая гниль у рыб левомицетином

5.2.2.1 Подготовка копределению в соответствии с 5.1.1.1 для тест-набора № 4 по 3.10.

5.2.2.2 Проведение определения в соответствии с 5.1.1.2.

5.2.2.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность окрашенных в синий цвет зон в окнах индикаторного устройства в соответствии с А.4 (приложение А).

Если после проведения определения no S.2.2.2 изменения цвета контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Большая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.2.3 Метод с использованием тест-набора Ns 5

Метод основан на реакции комллексообраэования антибиотиков бета-лактамного типа и тетра-циклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.2.3.1 Подготовка копределению

Тест-набор No 5 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2 *С до 8 ®С не более 12 мес. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15 *С до 30 *С в течение 10 мин.

Термостат или водяную баню нагревают до температуры (37,5 ± 1,0) ‘С.

Флаконы с реагентом встряхивают для осаждения содержимого на дне.

5.2.3.2 Проведение определения

Снимают крышку с флакона. Пипеткой с наконечником вносят 0,2 см э анализируемого молока во флакон, закрывают его крышкой, встряхивают до растворения реактива и снимают крышку.

Для каждого флакона используют новый наконечник на пипетку.

Флакон помещают в термостат или на водяную баню и выдерживают при температуре (37.5 ± 1) *С в течение 5 мин. Затем ео флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают 3 мин. По истечении времени индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат.

5.2.3.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.5 (приложение А).

Зона центральной части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контроль-ной. Если после проведения определения по 5.2.3.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков тетрациклиноеой группы — под контрольной зоной.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.3 Метод одновременного определения наличия левомицетина и стрептомицина с

использованием тест-набора № 6

Метод основан на реакции комплексообраэования левомицетина и стрептомицина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.3.1 Подготовка к определению

Тест-набор Ne 6 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2®С до 8 *С не более 12 мес. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15 ®С до 30 *С в течение 10 мин.

Термостат или водяную баню нагревают до температуры 3 анализируемого молока во флакон.

Флакон помещают в термостат или на водяную баню. Во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают при температуре (47,5 ± 1) ‘С е течение 5 мин. Затем индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат.

5.3.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.6 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.3.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения левомицетина на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной зоной. Зона определения стрептомицина — под контрольной зоной второй.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.4 Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа,

тетрациклиноеой группы, левомицетина и стрептомицина

5.4.1 Метод с использованием тест-набора № 7

Метод основан на реакции комллексообразования антибиотиков бета-лактамного типа, тетраци-клиновой группы, левомицетина и стрептомицина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

Метод распространяется на молоко и сыворотку, в том числе сухую.

5.4.1.1 Подготовка к определению е соответствии с 5.2.1.1 для тест-набора № 7 по 3.10.

5.4.1.2 Проведение определения

Микропробирки извлекают из пенала и помещают в термостат или на водяную баню с температурой (40 1 3) *С. 8 каждую микропробирку пипеткой с наконечником вносят 0.2 см 3 анализируемого б

молока, перемешивают, наполняя и сливая содержимое с помощью пипетки пять раз для получения однородного раствора, и выдерживают в термостате (на водяной бане) в течение 5 мин.

Для каждой микролунки используют новый наконечник на пипетку.

Индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из пенала, помещают в микропробирки и выдерживают в термостате (на водяной бане) при температуре (40 ± 3) *С в течение 5 мин. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из микропробирок и считывают результат.

Определение с использованием контрольных растворов проводят, как указано выше, при этом в одну микропробирку пипеткой с наконечником вносят 0.2 см 3 раствора «Positive Standard», в другую — 0.2 см 3 раствора «Negative Standard».

5.4.1.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторных полосках хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.7 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.4.1.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке расположена под контрольной зоной первой. Зона определения левомицетина — под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина — под контрольной зоной третьей. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа — под контрольной зоной четвертой.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков, по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

При проведении определений с применением контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard» обработку результатов проводят как указано выше.

5.4.2 Метод с использованием тест-набора Ns 8

Метод основан на реакции комплексообраэоеания антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина оо специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.4.2.1 Подготовка к определению в соответствии с 5.3.1 для тест-набора Ne 8 по 3.10.

5.4.2.2 Проведение определения в соответствии с 5.3.2.

5.4.2.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон. появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.8 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения no S.4.2.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке расположена под контрольной зоной первой. Зона определения левомицетина — под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина — под контрольной зоной третьей. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа — под контрольной зоной четвертой.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков, по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

6 Метрологические характеристики

Наименьшие пределы определения антибиотиков в молоке и молочных продуктах представлены

Наименьший предел определения антибиотиков с ислольювамием тест-иаборов. мг/хг

источник

«ГОСТ Р 53774-2010. Национальный стандарт Российской Федерации. Молоко и молочные продукты. Иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков»

Документ по состоянию на август 2014 г.

Утвержден
и введен в действие

агентства по техническому
регулированию и метрологии
от 26 февраля 2010 г. N 24-ст

Дата введения —
1 января 2011 года

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0-2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения».

1. Разработан Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности Россельхозакадемии (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии).

2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 «Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность».

3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 26 февраля 2010 г. N 24-ст.

4. Взамен ГОСТ Р 51600-2000 в части разделов 5 и 6 (рецепторные методы).

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.

Настоящий стандарт распространяется на сырое, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое коровье молоко (далее — молоко) и устанавливает качественные иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков:

— методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа;

— методы определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы;

— методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы;

— метод одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина;

— метод определения наличия гентамицина;

— метод определения наличия сульфаметазина.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 53430-2009. Молоко и продукты переработки молока. Методы микробиологического анализа

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80). Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3145-84. Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия

ГОСТ 6709-72. Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026-76. Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 16317-87. Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28498-90. Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81). Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования.

Примечание — При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю «Национальные стандарты», который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3.1. Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 37 °C до 66 °C с допустимой погрешностью +/- 0,5 °C.

3.2. Блок термостатированных ячеек, позволяющий поддерживать температуру (47,5 +/- 1,0) °C.

3.3. Холодильник бытовой, позволяющий поддерживать температуру от 0 °C до 12 °C по ГОСТ 16317.

3.4. Камера морозильная, позволяющая поддерживать температуру минус (20 +/- 2) °C.

3.5. Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.

3.6. Термометр лабораторный стеклянный с диапазоном измерения от 0 °C до 100 °C ценой деления шкалы 1 °C по ГОСТ 28498.

3.7. Пипетки вместимостью 0,5 и 1,0 куб. см по ГОСТ 29227.

3.8. Колбы мерные вместимостью 50 куб. см по ГОСТ 1770.

3.9. Колбы конические вместимостью 250 куб. см по ГОСТ 25336.

3.10. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.11. Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

3.12. Тест-наборы для определения наличия антибиотиков:

— тест-набор N 1 для определения антибиотиков бета-лактамного типа, включающий укупоренные пробирки с 3,3,5,5-триметилбензидином и специфическими рецепторами; пипетки мерные вместимостью 0,4 куб. см; индикаторное устройство с диметилсульфоксидом;

— тест-набор N 2 для определения антибиотиков бета-лактамного типа, включающий флаконы, содержащие специфические рецепторы, меченные коллоидным золотом; полоски хроматографической бумаги с зоной анализируемого молока и контрольной зоной; шприцы-дозаторы вместимостью 0,2 куб. см с одноразовыми наконечниками;

— тест-набор N 3 для определения антибиотиков бета-лактамного типа, включающий в себя запечатанные фольгой флаконы с лиофилизатом, индикаторные полоски хроматографической бумаги, одноразовые пипетки вместимостью 0,15 куб. см;

— тест-набор N 4 для определения антибиотиков тетрациклиновой группы в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N 1;

— тест-набор N 5 для определения антибиотиков тетрациклиновой группы в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N 2;

— тест-набор N 6 для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы, включающий пластины микропробирок с буферным солевым раствором и специфическими рецепторами, позволяющими определять антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы, индикаторные полоски хроматографической бумаги; шприц-дозатор вместимостью 0,2 куб. см с одноразовыми наконечниками; контрольные растворы: пробирки или флаконы со смесью сухого молока с массовой концентрацией пенициллина-G 0,004 мкг/г и окситетрациклина 0,1 мкг/г, красителя («Positive Standard»); пробирки и флаконы со смесью сухого молока без антибиотиков и красителя («Negative Standard»);

— тест-набор N 7 для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N 2;

Читайте также:  Пить аспирин с левомицетином

— тест-набор N 8 для определения антибиотиков бета-лактамного типа, включающий в себя герметично укупоренный пакет, содержащий закрытый крышкой контейнер с индикаторными полосками хроматографической бумаги; одноразовые пластиковые пипетки вместимостью 0,5 куб. см; одноразовые пластиковые чашки;

— тест-набор N 9 для определения антибиотиков тетрациклиновой группы в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N 8;

— тест-набор N 10 для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N 1;

— тест-набор N 11 для определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетин и стрептомициновой группы, включающий пластиковые сосуды с пластинами микропробирок с буферным солевым раствором и специфическими рецепторами, индикаторные полоски хроматографической бумаги; шприц-дозатор вместимостью 0,2 куб. см и одноразовые наконечники к нему;

— тест-набор N 12 для определения гентамицина в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N 1;

— тест-набор N 13 для определения сульфаметазина в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N 1.

Тест-набор «Бета-лактам Snap», «Бета-лактам Snap СТ» (ООО «ЗИП-И»).

Тест-набор «Beta Star» (ООО «Хр. Хансен»).

Тест-набор «Delvotest BLF» (ООО «ДСМ Восточная Европа»).

Тест-набор «Тетрациклин Snap» (ООО «ЗИП-И»).

Тест-набор «Tetra Star» (ООО «Хр. Хансен»).

Тест-набор «Betastar Combo», «Betastar Combo HS» (ООО «Хр. Хансен»).

Тест-набор «Milk Doctor Beta» (AR Brown Co., Ltd/ООО «СЭЙФИД»).

Тест-набор «Milk Doctor Tetra» (AR Brown Co., Ltd/ООО «СЭЙФИД»).

Тест-набор «Дуо Бета-Тетра Snap», «Дуо Бета-Тетра Snap CT» (ООО «ЗИП-И»).

Тест-набор «Гентамицин Snap» (ООО «ЗИП-И»).

Тест-набор «Сульфаметазин Snap» (ООО «ЗИП-И»).

— Указанные тест-наборы являются рекомендуемыми к применению. Эта информация приведена для сведения пользователей настоящего стандарта и не означает, что стандарт устанавливает их обязательное применение. Допускаются к использованию тест-наборы производства других изготовителей, обеспечивающие требования настоящего стандарта.

3.13. Баня водяная с терморегулятором, поддерживающая температуру от 37 °С до 66 °С.

Применение конкретного оборудования, средств измерений, посуды, материалов и реактивов осуществляют в соответствии с требованиями разделов 4 и 5.

Допускается применение других средств измерений, вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

Отбор проб — по ГОСТ Р 53430 с дополнением. Допускается хранить пробы молока для определения в холодильнике при температуре (5 +/- 1) °C не более 24 ч.

5.1. Методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа

5.1.1. Метод с использованием тест-набора N 1

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков бета-лактамного типа устанавливают, сравнивая цвет зоны анализируемого молока с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.

5.1.1.1. Подготовка к определению

Вскрывают упаковку тест-набора N 1, проверяют положение шарика реактива в пробирке, который должен находиться на дне. При необходимости шарик реактива устанавливают на дно пробирки встряхиванием.

Срок хранения тест-набора N 1 (без упаковки) при температуре (20 +/- 2) °C — не более 24 ч.

5.1.1.2. Проведение определения

Для тест-набора N 1 («Бета-лактам Snap») мерную пипетку вместимостью 0,4 куб. см наполняют анализируемым молоком до метки и выливают в пробирку. Пробирку закрывают и тщательно перемешивают круговыми движениями до растворения реактива.

Пробирку и индикаторное устройство помещают в термостат и выдерживают при температуре (45 +/- 5) °С в течение 5 — 6 мин.

Индикаторное устройство вынимают из термостата и устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.

При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.

Индикаторное устройство выдерживают в термостате при температуре (45 +/- 5) °С в течение 4 мин. Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин. после извлечения устройства из термостата.

Для тест-набора N 1 («Бета-лактам Snap CT») мерную пипетку вместимостью 0,4 куб. см наполняют анализируемым молоком до метки и выливают в пробирку. Пробирку закрывают и тщательно перемешивают круговыми движениями до растворения реактива.

Индикаторное устройство выдерживают при температуре от 15 °С до 30 °С в течение 4 мин. Индикаторное устройство устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.

При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.

Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин. после извлечения устройства из термостата.

5.1.1.3. Обработка результатов

Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (Приложение А).

Контрольная зона должна быть синего цвета.

Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.1.1.2 не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором N 1.

Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке отсутствуют.

Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве белый или светлее цвета контрольной зоны, антибиотики бета-лактамного типа в анализируемом молоке присутствуют.

5.1.2. Метод с использованием тест-набора N 2

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.

5.1.2.1. Подготовка к определению

Необходимое для проведения определения количество комплектов тест-наборов N 2 по 3.12 перед применением выдерживают при комнатной температуре в течение 10 — 15 мин.

Флаконы с реагентом по 3.12 встряхивают для полного осаждения содержимого на дне.

5.1.2.2. Проведение определения

Шприцем-дозатором с одноразовым наконечником по 3.12 отбирают 0,2 куб. см анализируемого молока и переливают во флакон. Флакон закрывают крышкой, встряхивают до полного растворения сухих веществ, затем открывают флакон и помещают его в блок термостатированных ячеек по 3.2 при температуре (47,5 +/- 1,0) °C на 3 мин. Во флакон, находящийся в блоке термостатированных ячеек, помещают полоску хроматографической бумаги и термостатируют еще 2 мин. Затем полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона.

5.1.2.3. Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения определения по 5.1.2.2 в соответствии с А.2 (Приложение А).

Зона в верхней части полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют.

Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.

Большая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствуют о присутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.

5.1.3. Метод с использованием тест-набора N 3

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа с мечеными белковыми рецепторами, содержащимися в лиофилизате, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги.

5.1.3.1. Подготовка к определению

Тест-набор N 3 хранят в холодильнике при температуре от (6 +/- 2) °С не более 6 мес.

Анализируемое молоко переливают в колбу по 3.8 или 3.9, помещают в термостат и выдерживают в нем до достижения температуры молока (64 +/- 2) °С.

Необходимое для проведения определения количество входящих в состав тест-набора N 3 флаконов извлекают из набора и открывают, удаляя фольгу.

5.1.3.2. Проведение определения

Одноразовой пипеткой отбирают 0,15 куб. см анализируемого молока, переливают во флакон и перемешивают круговыми движениями.

Флакон с анализируемым молоком помещают в термостат и выдерживают при температуре (64 +/- 2) °С в течение 2 мин. После этого флакон достают из термостата и перемешивают круговыми движениями.

Во флакон помещают полоску хроматографической бумаги на 3 мин., после чего извлекают из флакона и считывают результат.

5.1.3.3. Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения процедур по 5.1.3.2 в соответствии с А.2 (Приложение А).

Зона в верхней части полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют.

Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.

Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке».

5.1.4. Метод с использованием тест-набора N 8

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа со специфическим иммунокомплексом антител, меченных коллоидным золотом, и антигенов с последующим визуальным выявлением оставшихся свободными иммунокомплексов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги.

5.1.4.1. Подготовка к определению

Тест-набор N 8 хранят в холодильнике или другом сухом месте при температуре от 2 °С до 30 °С не более года.

Вскрывают герметично укупоренный пакет, достают закрытый крышкой контейнер. Открывают контейнер, крышку помещают на стол вниз донышком.

Открытый контейнер выдерживают при температуре от 15 °С до 30 °С в течение 10 — 15 мин.

Необходимое для проведения определения количество пластиковых чашек достают из пакета и ставят по одной на ровную сухую поверхность.

5.1.4.2. Проведение определения

Одноразовой пипеткой отбирают 0,2 куб. см анализируемого молока до специальной метки и переливают в чашку. Этой же пипеткой отбирают еще 0,2 куб. см анализируемого молока и переливают в ту же чашку. Встряхивают чашку для равномерного распределения анализируемого молока по ее дну.

Из контейнера берут полоску хроматографической бумаги и помещают ее в чашку под наклоном так, чтобы она касалась и дна, и стенки чашки. Через 5 мин. полоску хроматографической бумаги извлекают из чашки и считывают результат.

5.1.4.3. Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения процедур по 5.1.4.2 в соответствии с А.6 (Приложение А).

Появление трех полосок одинакового интенсивно-красного цвета свидетельствует об отсутствии антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке.

Если одна или две линии из трех не появились или цвет их менее интенсивный, это свидетельствует о наличии антибиотиков бета-лактамного типа в молоке.

Если окрашивания не произошло или появились три полоски одинакового бледно-розового цвета, результат считают недействительным и определение повторяют по 5.1.4.2.

5.2. Методы определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы

5.2.1. Метод с использованием тест-набора N 4

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики тетрациклиновой группы захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков тетрациклиновой группы устанавливают, сравнивая цвет зоны анализируемого молока с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.

5.2.1.1. Подготовка к определению

Подготовку тест-набора N 4 по 3.12 проводят по 5.1.1.1.

5.2.1.2. Проведение определения по 5.1.1.2 (для тест-набора N 1 («Бета-лактам Snap»))

5.2.1.3. Обработка результатов

Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (Приложение А).

Контрольная зона должна быть синего цвета.

Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.1.1.2 не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором N 4.

Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, антибиотики тетрациклиновой группы в анализируемом молоке отсутствуют.

Белый или менее интенсивный цвет зоны анализируемого молока по сравнению с цветом контрольной зоны свидетельствует о присутствии в нем антибиотиков тетрациклиновой группы.

5.2.2. Метод с использованием тест-набора N 5

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.

5.2.2.1. Подготовка к определению

Подготовку тест-набора N 5 по 3.12 проводят по 5.1.2.1.

5.2.2.2. Проведение определения

Шприцем-дозатором с одноразовым наконечником по 3.12 отбирают 0,2 куб. см анализируемого молока и переливают во флакон. Флакон закрывают крышкой, встряхивают до полного растворения сухих веществ, затем открывают флакон и помещают его в блок термостатированных ячеек при температуре (47,5 +/- 1,0) °C на 2 мин. Во флакон, находящийся в блоке термостатированных ячеек, помещают полоску хроматографической бумаги и термостатируют еще 3 мин. Затем полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона.

5.2.2.3. Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения определения по 5.2.2.2 в соответствии с А.3 (Приложение А).

Зона в верхней части полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.

Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствуют о присутствии антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке.

5.2.3. Метод с использованием тест-набора N 9

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков тетрациклиновой группы со специфическим иммунокомплексом антител, меченных коллоидным золотом, и антигенов с последующим визуальным выявлением оставшихся свободными иммунокомплексов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги.

5.2.3.1. Подготовка к определению по 5.1.4.1.

5.2.3.2. Проведение определения по 5.1.4.2.

5.2.3.3. Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий после проведения процедур по 5.2.3.2 в соответствии с А.3 (Приложение А).

Зона в верхней части полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют.

Читайте также:  Плавниковая гниль у гуппи левомицетин

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.

Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков анализируемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке.

5.3. Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы

5.3.1. Метод с использованием тест-набора N 6

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.3.1.1. Подготовка к определению

Из тест-набора N 6 по 3.12 отбирают необходимое количество пеналов и перед их открытием выдерживают при комнатной температуре до видимого испарения влаги с поверхности.

Из тест-набора N 6 отбирают и маркируют необходимое количество микропробирок (не более 8) с учетом контрольных растворов.

Термост нагревают до температуры (40 +/- 3) °C и выдерживают при этой температуре не менее 5 мин.

Восстановление контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard»

В пробирки с контрольными растворами пипеткой вносят по 1 куб. см дистиллированной воды (0,4 куб. см для контрольных растворов во флаконах) и тщательно перемешивают до образования однородного раствора.

Срок хранения восстановленных контрольных растворов в морозильной камере при температуре минус 20 °C — не более 6 мес. Не допускается повторное замораживание восстановленных контрольных растворов.

5.3.1.2. Проведение определения

Микропробирки по 3.12 помещают в термостат. В каждую микропробирку шприцем-дозатором с наконечником вносят 0,2 куб. см анализируемого молока, быстро перемешивают его с реагентом, наполняя и сливая смесь шприцем-дозатором пять раз для получения однородного раствора, и выдерживают его в течение 3 мин.

В микропробирки помещают индикаторные полоски хроматографической бумаги и термостатируют в течение 3 мин. при температуре (40 +/- 3) °C. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают.

Определение с использованием контрольных растворов проводят, как указано выше, при этом в одну микропробирку вносят 0,2 куб. см раствора «Positive Standard», в другую — 0,2 куб. см раствора «Negative Standard».

5.3.1.3. Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на индикаторных полосках хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.4 (Приложение А).

Зона центральной части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной.

Если после проведения определения окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют по 5.3.1.2.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа — под контрольной зоной.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания зоны определения антибиотиков свидетельствуют о присутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

При проведении определений с применением контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard» обработку результатов проводят, как указано выше.

5.3.2. Метод с использованием тест-набора N 7

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.3.2.1. Подготовка к определению

Подготовку тест-набора N 7 по 3.12 проводят по 5.1.2.1.

5.3.2.2. Проведение определения с использованием тест-набора N 7 («Betastar Combo») в соответствии с 5.2.2.2.

Проведение определения с использованием тест-набора N 7 («Betastar Combo HS»): шприцем-дозатором с одноразовым наконечником отбирают 0,2 куб. см анализируемого молока и переливают во флакон. Флакон закрывают крышкой, встряхивают до полного растворения сухих веществ, затем открывают и помещают в блок термостатированных ячеек при температуре (37,5 +/- 1,0) °С на 5 мин. Во флакон, находящийся в блоке термостатированных ячеек, помещают полоску хроматографической бумаги и выдерживают еще 3 мин. Затем полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и удаляют уплотнение с конца полоски. По истечении 5 мин. проводят обработку результатов.

5.3.2.3. Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на полосках хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.5 (Приложение А).

Зона центральной части полоски хроматографической бумаги является контрольной.

Если после проведения определения по 5.2.2.2 не произошло окрашивания контрольной зоны, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новой тест-полоской.

Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке на полоске хроматографической бумаги расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы — под контрольной зоной.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков испытуемого молока по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания зон определения антибиотиков свидетельствуют о присутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.3.3. Метод с использованием тест-набора N 10

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы устанавливают, сравнивая цвет зон анализируемого продукта с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.

5.3.3.1. Подготовка к определению в соответствии с 5.1.1.1.

5.3.3.2. Проведение определения

Для тест-набора «Дуо Бета-Тетра Snap» мерную пипетку вместимостью 0,4 куб. см наполняют анализируемым молоком до метки и выливают в пробирку. Пробирку закрывают и тщательно перемешивают круговыми движениями до растворения реактива.

Пробирку и индикаторное устройство помещают в термостат и выдерживают при температуре (45 +/- 5) °С в течение 5 — 6 мин.

Индикаторное устройство вынимают из термостата и устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.

При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.

Индикаторное устройство выдерживают в термостате при температуре (45 +/- 5) °С в течение 4 мин. Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин. после извлечения устройства из термостата.

Для тест-набора «Дуо Бета-Тетра Snap CT» мерную пипетку вместимостью 0,4 куб. см наполняют анализируемым молоком до метки и выливают в пробирку. Пробирку закрывают и тщательно перемешивают круговыми движениями до растворения реактива.

Индикаторное устройство выдерживают при температуре от 15 °С до 30 °С в течение 4 мин. Индикаторное устройство устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемого молока находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.

При появлении анализируемого молока в круглом окне клавиши индикаторного устройства клавишу нажимают до щелчка для изменения тока жидкости и промывания пористого материала раствором антибиотиков.

Стабильность окраски сохраняется в течение 15 мин после извлечения устройства из термостата.

5.3.3.3. Обработка результатов

Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.7 (Приложение А).

Контрольная зона должна быть синего цвета.

Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.3.3.2 не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором N 10.

Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, антибиотики в анализируемом молоке отсутствуют.

Белый или менее интенсивный цвет зоны анализируемого молока по сравнению с цветом контрольной зоны свидетельствует о наличии в анализируемом молоке антибиотиков.

5.4. Метод одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина с использованием тест-набора N 11

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.4.1. Подготовка к определению

5.4.1.1. Тест-набор N 6 по 3.12 хранят в холодильнике при температуре от 2 °С до 8 °С. Перед открытием пеналы выдерживают при комнатной температуре до видимого испарения влаги с поверхности.

Берут необходимое число микропробирок (не более 8) с учетом контрольных растворов и маркируют их. Оставшиеся микропробирки хранят в холодильнике при температуре от 2 °С до 8 °С.

5.4.1.2. Термостат или водяную баню нагревают до температуры (40 +/- 3) °С и выдерживают при этой температуре не менее 5 мин.

5.4.1.3. Подготовка контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard».

В стеклянные пробирки с контрольными растворами пипеткой вносят по 1 куб. см дистиллированной воды (0,4 куб. см для контрольных растворов в пластиковых флаконах) и перемешивают до образования однородного раствора. Восстановленные контрольные растворы хранят в морозильной камере при температуре минус 20 °С. Не допускается повторное замораживание восстановленных контрольных растворов.

5.4.2. Проведение определения

5.4.2.1. Микропробирки помещают в термостат или на водяную баню. В каждую микропробирку шприцем-дозатором с наконечником вносят 0,2 куб. см анализируемого молока, быстро перемешивают его с реагентом, наполняя и сливая смесь шприцем-дозатором пять раз для получения однородного раствора, и выдерживают его в течение 5 мин.

5.4.2.2. В микропробирки помещают индикаторные полоски хроматографической бумаги и выдерживают в термостате или на водяной бане в течение 5 мин. при температуре (40 +/- 3) °С. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают.

5.4.3. Обработка результатов

5.4.3.1. Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся на индикаторных полосках хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.8 (Приложение А).

5.4.3.2. Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения процедур окрашивания контрольной зоны не произошло, то результат считается недействительным и процедуры по 5.4.2 повторяют.

5.4.3.3. Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке расположена под контрольной зоной первой. Зона определения левомицетина — под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина — под контрольной зоной третьей. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа — под контрольной зоной четвертой.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания зоны определения антибиотиков свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.4.3.4. При проведении испытаний с использованием контрольных растворов «Positive Standard» и «Negative Standard» обработку результатов осуществляют в соответствии с 5.4.3.1 — 5.4.3.3.

5.5. Метод определения гентамицина с использованием тест-набора N 12

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой гентамицин захватывается специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие гентамицина устанавливают, сравнивая цвет зон анализируемого продукта с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.

5.5.1. Подготовка к определению в соответствии с 5.1.1.1.

5.5.2. Проведение определения в соответствии с 5.2.1.2.

5.5.3. Обработка результатов

Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (Приложение А).

Контрольная зона должна быть синего цвета.

Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.5.2 не произошло, то определение наличия гентамицина в молоке повторяют с новым тест-набором N 12.

Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, гентамицин в анализируемом молоке отсутствует.

Белый или менее интенсивный цвет зоны анализируемого молока по сравнению с цветом контрольной зоны свидетельствует о наличии гентамицина в анализируемом молоке.

5.6. Метод определения сульфаметазина с использованием тест-набора N 13

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой сульфаметазин захватывается специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом, содержащим индикатор, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие сульфаметазина устанавливают, сравнивая цвет зон анализируемого продукта с цветом контрольной зоны индикаторного устройства.

5.6.1. Подготовка к определению в соответствии с 5.1.1.1.

5.6.2. Проведение определения в соответствии с 5.5.2.

5.6.3. Обработка результатов

Сравнивают цвет контрольной зоны в окне индикаторного устройства с цветом зоны анализируемого молока в соответствии с А.1 (Приложение А).

Контрольная зона должна быть синего цвета.

Если изменение цвета контрольной зоны после проведения определения по 5.6.2 не произошло, то определение наличия сульфаметазина в молоке повторяют с новым тест-набором N 13.

Если цвет зоны анализируемого молока на индикаторном устройстве аналогичен или темнее цвета контрольной зоны, сульфаметазин в анализируемом молоке отсутствует.

Белый или менее интенсивный цвет зоны анализируемого молока по сравнению с цветом контрольной зоны свидетельствует о наличии сульфаметазина в анализируемом молоке.

Наименьшие пределы определения антибиотиков в молоке и молочных продуктах приведены в таблице 1.

Приложение А
(обязательное)

ПРИМЕРЫ ВОЗМОЖНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ НАЛИЧИЯ АНТИБИОТИКОВ В АНАЛИЗИРУЕМОМ МОЛОКЕ И МОЛОЧНЫХ ПРОДУКТАХ

А.1. Примеры результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах приведены на рисунке А.1.

А.2. Примеры результатов определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке и молочных продуктах приведены на рисунке А.2 (здесь и далее рисунки не приводятся).

А.3. Примеры результатов определения наличия антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке и молочных продуктах приведены на рисунке А.3.

А.4. Примеры результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора N 6 приведены на рисунке А.4.

А.5. Примеры результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора N 7 приведены на рисунке А.5.

А.6. Примеры результатов определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора N 8 приведены на рисунке А.6.

А.7. Примеры результатов определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора N 10.

А.8. Примеры (некоторые) результатов определения наличия антибиотиков в анализируемом молоке и молочных продуктах с использованием тест-набора N 11 приведены на рисунке А.8.

[1] СП 1.2.731-99. Безопасность работы с микроорганизмами III — IV групп патогенности и гельминтами.

источник