Левомицетин в мясе метод определения

ГОСТ Р ИСО 13493-2005 Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) с помощью жидкостной хроматографии

Текст ГОСТ Р ИСО 13493-2005 Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) с помощью жидкостной хроматографии

ПО ТЕХНИЧЕСКОМУ РЕГУЛИРОВАНИЮ И МЕТРОЛОГИИ

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ISO 13493:1998 Meat and meat products — Determination of chloramphenicol content — Method using liquid chromatography (IDT)

Москва Стандартинформ 2006

Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. № 184-ФЗ «О техническом регулировании», а правила применения национальных стандартов Российской Федерации — ГОСТ Р 1.0—2004 «Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения»

1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным учреждением «Всероссийский научно-исследовательский институт птицеперерабатывающей промышленности» Российской академии сельскохозяйственных наук (ГУ ВНИИПП Россельхозакадемии) на основе собственно аутентичного перевода, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК116 «Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки»

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 16 декабря 2005 г. № 314-ст

4 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ИСО 13493:1998 «Мясо и мясные продукты. Определение содержания хлорамфеникола. Метод жидкостной хроматографии» (IS013493:1998 «Meat and meat products — Determination of chloramphenicol content — Method using liquid chromatography»). Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5—2004 (пункт 3.5).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных (региональных) стандартов соответствующие им национальные стандарты Российской Федерации, сведения о которых приведены в дополнительном приложении Б

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячно издаваемых информационных указателях «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте национального органа Российской Федерации по стандартизации в сети Интернет

Настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен, тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ

Метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) с помощью жидкостной хроматографии

Method for determination of chloramphenicol content using liquid chromatography

Настоящий стандарт устанавливает метод определения с помощью жидкостной хроматографии содержания хлорамфеникола в мышечной ткани мяса, включая мясо птицы, где массовая доля хлорамфеникола составляет не менее 6,5 мкг/кг.

Данный метод неприменим к испорченным образцам.

Примечание — Настоящий стандарт допускается применять для определения содержания хлорамфеникола во всех видах мяса и мясопродуктов. Однако межлабораторные испытания по установлению точности метода были проведены только на образцах мышечной ткани.

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ИСО 3100-1:1991 Мясо и мясные продукты. Методы отбора и подготовки образцов. Часть 1. Отбор образцов

ИСО 3696:1987 Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний

ИСО 5725-1:1994 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

ИСО 5725-2:1994 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

3.1 содержание хлорамфеникола в мясе и мясных продуктах: Массовая доля хлорамфеникола, измеренная с помощью метода, установленного в настоящем стандарте.

Примечание — Содержание хлорамфеникола выражают в микрограммах на килограмм.

Хлорамфеникол из пробы экстрагируют водой. Экстракт фильтруют и полученный водный раствор очищают от липофильных компонентов методом твердофазной экстракции. Хлорамфеникол элюируют с экстракционного патрона дихлорметаном. Органический растворитель выпаривают и остаток очищают с помощью жидко-жидкостной экстракции в системе вода-толуол. Хлорамфеникол определяют методом обращенно-фазной хроматографии с детектированием в ультрафиолетовой (УФ) области спектра.

При отсутствии специальных указаний используют реактивы только признанных аналитических марок.

5.1 Вода должна соответствовать требованиям квалификации не ниже 3-й степени чистоты согласно ИСО 3696. Вода не должна содержать органические примеси.

5.2 Азот, пригодный для выпаривания растворителей.

5.5 Ацетатный буфер, с (CH₃CO₂Na) = 0,01 моль/дм 3 , pH = 4,3.

Растворяют 0,82 г безводного ацетата натрия примерно в 970 см 3 воды. С помощью рН-метра (6.1) доводят pH до 4,3 добавлением раствора уксусной кислоты массовой долей 50 %. Переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 см 3 . Доводят водой до метки и перемешивают.

5.6 Ацетонитрил для УФ спектроскопии.

К 250 см 3 ацетонитрила (5.6) добавляют 750 см 3 ацетатного буфера (5.5) и тщательно перемешивают.

Перед использованием элюент фильтруют через мембранный фильтр 0,22 мкм (6.2) и дегазируют.

5.8 Основной раствор хлорамфеникола массовой концентрации 100 мкг/см 3 .

Взвешивают 10 мг хлорамфеникола с точностью 0,1 мг и переносят навеску в мерную колбу вместимостью 100 см 3 . Добавляют метанол до метки и перемешивают.

Приготовленный основной раствор стабилен в течение 1 мес при хранении в темноте.

5.9 Стандартные растворы хлорамфеникола.

Пипеткой вносят 5,0 см 3 основного раствора (5.8) в мерную колбу вместимостью 100 см 3 . Разбавляют водой до метки и перемешивают. Разбавляют 1,0,2,0,5,0 и 15,0 см 3 этого раствора до 100 см 3 для получения четырех стандартных растворов с массовой концентрацией хлорамфеникола соответственно 0,05; 0,10; 0,25 и 0.75 мкг/см 3 .

Эти стандартные растворы стабильны в течение одной недели при хранении в темноте.

Используют обычное лабораторное оборудование, в частности:

6.2 Мембранный фильтр с малым мертвым объемом и размером пор 0,22 мкм.

6.3 Механическое или электрическое устройство, пригодное для измельчения образца.

В качестве такого устройства может быть использован высокоскоростной ротационный куттер или мясорубка с решеткой, диаметр отверстий которой не превышает 4 мм.

6.4 Лабораторный гомогенизатор (например гомогенизатор типа Стомахер или Вортекс) 1 *.

6.5 Фильтровальная бумага обеззоленная быстрофильтрующая диаметром примерно 15 см.

Примечание — Например, можно использовать Ватман 414

6.6 Экстракционные патроны вместимостью 20 см 3 с диатомитовой землей, которая задерживает липофильные компоненты из водных растворов.

Примечание — Можно использовать, например, картриджи Extrelut® производства фирмы Merck, Дармштадт, Германия (№ 11737) 1 >.

6.7 Водяная баня или нагревательный блок, позволяющие поддерживать температуру (40 ± 1) °C и имеющие устройство для выпаривания потоком азота (5.2), или ротационный вакуумный испаритель.

6.8 Центрифужные пробирки вместимостью 25 см 3 .

6.9 Смеситель для пробирок типа Вортекс, обеспечивающий частоту вращения примерно 700 мин -1 .

6.10 Центрифуга, обеспечивающая радиальное ускорение примерно 1000 д.

6.11 Микропипетки вместимостью 300 мм 3 .

Это примеры коммерчески доступной продукции. Данная информация приведена только для удобства пользователей настоящего стандарта и не является поддержкой этой продукции.

6.12 Жидкостной хроматограф, оборудованный:

— насосом постоянного потока;

— хроматографической колонкой внутренним диаметром 3 мм, длиной 20 см, заполненную обращенной фазой С₈ или С₁₈ с размером частиц 5 мкм, или другой колонкой с эквивалентными характеристиками;

— детектором УФ/ВИД, обеспечивающим измерение при длине волны 285 нм, если возможно — диодно-матричный детектором (используется для подтверждения обнаружения хлорамфеникола);

— самописцем с регулируемым диапазоном измерения или интегратором.

Отбор образцов не является частью метода, изложенного в настоящем стандарте. Рекомендуемый метод отбора образцов приведен в ИСО 3100-1.

Очень важно, чтобы в лабораторию поступали представительные образцы, которые в процессе хранения и транспортирования не были испорчены или изменены.

От представительного образца, поступившего в лабораторию, отбирают для анализа образец массой не менее 200 г. Образец хранят 8 условиях, исключающих его порчу и изменение состава.

Доводят температуру образца до комнатной температуры. Удаляют жировую ткань и несъедобные части образца.

Измельчают образец с помощью устройства (6.3). При этом необходимо следить за тем, чтобы температура образца не превышала 25 °C. При использовании мясорубки образец пропускают через нее не менее двух раз.

Приготовленный образец помещают в герметично закрываемую емкость. Закрывают и хранят так, чтобы не допустить порчи и изменения его состава.

В случае необходимости образец хранят при температуре ниже минус 18 °C.

Анализ образца проводят как можно быстрее, но не позднее 24 ч после измельчения.

Примечание — Для контроля повторяемости результатов (см. 11.2) проводят два параллельных определения в соответствии с 9.1—9.6.

Параллельно с анализом раствора (или серии растворов), полученного из испытуемого образца, проводят анализ раствора, полученного из образца, заведомо не содержащего хлорамфеникол (образец-бланк), и раствора, полученного из образца, в который добавлен хлорамфеникол в количестве 10 мкг/кг (образец-бланк с внесенным хлорамфениколом).

В конической колбе вместимостью 100 см 3 взвешивают 10 г (т) измельченного образца (8) с точностью 0,1 г.

Добавляют 40,0 см 3 воды и энергично перемешивают в течение 3 мин с помощью лабораторного гомогенизатора (6.4).

Общий объем образующейся водной фазы (Vi) равен 40,0 см 3 плюс объем воды, содержащейся в пробе (обычно в 10 г пробы содержится примерно 7,5 см 3 воды).

Гомогенат фильтруют через бумажный фильтр (5).

9.4 Твердофазная экстракция

Переносят 20,0 см 3 фильтрата (У₂) в экстракционный патрон (6.6).

Через (15 ± 2) мин элюируют хлорамфеникол с помощью 70 см 3 дихлорметана (5.3). Выпаривают органическую фазу до объема примерно 1 см 3 на водяной бане (6.7) в слабом потоке азота (5.2) или с помощью ротационного вакуумного испарителя (6.7).

С помощью примерно 10 см 3 дихлорметана (5.3) переносят остаток в центрифужную пробирку (6.8). Осторожно выпаривают досуха.

9.5 Жидко-жидкостная экстракция

К остатку добавляют 400 мм 3 воды (У₃) и 2,0 см 3 толуола (5.4) и перемешивают с умеренной интенсивностью в течение 1 мин на смесителе Вортекс (6.9) с частотой вращения примерно 700 мин -1 .

Центрифугируют в течение 5 мин на центрифуге (6.10) с радиальным ускорением 1000 д.

Пипеткой отбирают как можно больше органической фазы и отбрасывают ее.

Добавляют 1,5 см 3 толуола и перемешивают с умеренной интенсивностью в течение 1 мин на смесителе Вортекс (6.9) с частотой вращения примерно 700 мин -1 .

Центрифугируют в течение 5 мин на центрифуге (6.10) с радиальным ускорением 1000 д. Пипеткой отбирают как можно больше органической фазы и отбрасывают ее.

Микропипеткой (6.11) переносят 300 мм 3 водной фазы в подходящий сосуд.

9.6 Хроматографический анализ

9.6.1 Условия хроматографирования

Скорость бумаги самописца

Объемная скорость потока подвижной фазы (5.7) Объем анализируемого раствора, вводимый (инжектируемый) в хроматограф

от 0,005 до 0,010 единиц оптической плотное ти, что соответствует полной шкале само писца

Примечание — Инжектируемый объем и объемная скорость потока зависят от размеров колонки.

После стабилизации системы жидкостного хроматографа (6.12) инжектируют растворы, полученные из образца-бланка и образца-бланка с внесенным хлорамфениколом, четыре стандартных раствора хлорамфеникола (5.9), раствор, приготовленный из испытуемого образца по 9.5, и снова стандартные растворы хлорамфеникола (5.9).

На хроматограммах образцов проверяют наличие сигнала на участке, соответствующем времени удерживания хлорамфеникола.

Измеряют высоты или площади хроматографических пиков хлорамфеникола для испытуемого раствора и стандартных растворов хлорамфеникола.

Измеренные для стандартных растворов высоты или площади пиков должны линейно зависеть от содержания хлорамфеникола в этих растворах.

Примечание — С помощью диодно-матричного детектора может быть подтверждено обнаружение хлорамфеникола при его содержании в образце более 10 мкг/кг.

Содержание хлорамфеникола w, мкг/кг, в испытуемом образце рассчитывают по формуле

где h — высота или площадь пика в единицах длины или площади, измеренные для испытуемого раствора;

h_s — высота или площадь пика, измеренные для одного из стандартных растворов (5.9);

р — содержание хлорамфеникола в стандартном растворе, мкг/см 3 ;

т — масса испытуемой пробы (9.2), г;

V, — объем водной фазы, полученной после гомогенизации по 9.3, см 3 = 40 см 3 * объем воды в пробе, взятой на испытание);

У₂ — объем фильтрата (V₂ = 20 см 3 ), перенесенного по 9.4 в экстракционный патрон, см 3 ;

У₃ — объем воды (V₃ = 400 мм 3 ), добавленной по 9.5 к сухому остатку, мм 3 .

Результат вычислений округляют до 0,1 мкг/кг.

Результат испытаний нельзя корректировать на открываемость. Открываемость должна быть указана в протоколе испытаний (12).

11.1 Межлабораторные испытания

Точность метода была установлена с помощью межлабораторных испытаний, проведенных в соответствии с ИСО 5725-1 и ИСО 5725-2.

Результаты этой межлабораторной проверки опубликованы в [1]. Результаты этой проверки не могут быть распространены на области концентраций и на матрицы, отличные от указанных в настоящем стандарте.

Результаты другой межлабораторной проверки, приведенной в соответствии с ИСО 5725-1 и ИСО 5725-2, показывают, что открываемость для мяса, мяса птицы и мясных продуктов воспроизводима и равна примерно 55 %.

Абсолютное значение разности результатов двух независимых единичных испытаний, выполненных за короткий промежуток времени одним методом для одного измельченного образца в одной лаборатории одним оператором на одном и том же оборудовании, может превышать 2,1 мкг/кг не более чем в 5 % случаев при содержании хлорамфеникола в образце 10 мкг/кг.

Абсолютное значение разности результатов двух независимых единичных испытаний, выполненных одним методом для идентичного измельченного образца в разных лабораториях разными операторами с использованием разного оборудования, может превышать 4,9 мкг/кг не более чем в 5 % случаев при содержании хлорамфеникола 10 мкг/кг.

В протоколе испытания необходимо указать:

— информацию, необходимую для полной идентификации образца;

— использованный метод отбора образцов (если известен);

— использованный метод испытаний с указанием ссылки на настоящий стандарт;

— условия проведения испытаний, не отраженные в настоящем стандарте или считающиеся неоднозначными, а также все имевшие место случаи, которые могут повлиять на результаты испытаний;

— полученный результат испытаний или два результата испытаний, если проводилась проверка повторяемости;

[1] Aerts M L, Keukens H.J., Werdmuller GA. Liquid Chromatographic Determination of Chloramphenicol Residues in Meat: Interlaboratory Study. J.AOAC, 72, (4), 1989, pp. 570—576

ПРИЛОЖЕНИЕ Б (обязательное)

Сведения о соответствии национальных стандартов Российской Федерации ссылочным международным стандартам

Обозначение ссылочного международного стандарта

Обозначение и наименование соответствующего национального стандарта

ГОСТ Р 51447-99 (ИСО 3100-1—91

Мясо и мясные продукты. Методы отбора проб

Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

* Соответствующий национальный стандарт отсутствует. До его утверждения рекомендуется использовать перевод на русский язык данного международного стандарта. Перевод данного международного стандарта находится в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.

Ключевые слова: мясо, мясные продукты, хлорамфеникол, левомицетин, жидкостная хроматография

Редактор В.Н. Копысов Технический редактор Н.С. Гришанова Корректор АС. Черноусова Компьютерная верстка И.А. Налейкиной

Сдано а набор 23.12.2005. Подписано в печать 19.01.2006. Формат 60 х 84 1 /«. Бумага офсетная. Гарнитура Ариал. Печать офсетная. Усл. печ.л. 0,93. Уч.-изд-л. 0,65. Тираж 206 экэ. Зак. 29. С 2353.

ФГУП «Стандартинформ», 123995 Москва, Гранатный пер., 4. www.gosUnfo.ru Набрано во ФГУП «Стандартинформ» на ПЭВМ.

Отпечатано в филиале ФГУП «Стандартинформ» — тип. «Московский печатник», 105062 Москва, Лялин пер., 6.

источник

ГОСТ ISO 13493-2014
Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) с помощью жидкостной хроматографии

Устанавливает метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) в мышечной ткани мяса, включая мясо птицы, с помощью жидкостной хроматографии. Данный метод применим для определения хлорамфеникола при его содержании более 6,5 мкг/кг. Данный метод неприменим к испорченным образцам.

8 Подготовка пробы для анализа

Приложение ДА (справочное) Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам

Meat and meat products. Method for determination of chloramphenicol (levomycetin) content using liquid chromatography

Чтобы бесплатно скачать этот документ в формате PDF, поддержите наш сайт и нажмите кнопку:

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СОВЕТ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ. МЕТРОЛОГИИ И СЕРТИФИКАЦИИ

INTERSTATE COUNCIL FOR STANDARDIZATION. METROLOGY AND CERTIFICATION

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 «Межгосударственная система стандартизации. Основные положения» и ГОСТ 1.2-2009 «Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения. обновления и отмены»

1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом птицеперерабатывающей промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПП Россельхозакадемии) на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстан-

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. № 45)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004—97

Код страны no МК (ИСО 3166) 004—97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Госстандарт Республики Казахстан

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 10 сентября 2014 г. № 1048-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 13493-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2016 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 13493:1998 Meat and meat products — Determination of chloramphenicol content — Method using liquid chromatography (Мясо и мясные продукты. Определение содержания хлорамфеникола. Метод жидкостной хроматографии).

Международный стандарт разработан подкомитетом SC 6 «Мясо и мясные продукты» Технического комитета ISO/TC 34 «Пищевые продукты».

Перевод с английского языка (еп).

Официальный экземпляр международного стандарта, на основе которого подготовлен настоящий межгосударственный стандарт, имеется в Федеральном агентстве по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации.

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам приведены в дополнительном приложении ДА.

Степень соответствия — идентичная (IDT).

Настоящий стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р ИСО 13493-2005

УДК 637.544:006.354 МКС 67.120.10 ЮТ

Ключевые слова: мясо, мясные продукты, хлорамфеникол, левомицетин, жидкостная хроматография

Редактор Л.В. Корвтникова Технический редактор В Н. Прусакова Корректор М U Малахова Компьютерная верстка ВИГоищонко

Сдано в набор 23.03.2015 Подписано в печать 08 04 2015. Формат 60-84’/,. Гарнитура Ариал Уел пен л. 1.40

Уч.-изд. л. 0.90. Тираж 50экз. Зак 1538

Издано и отпечатано во ФГУП «СТАНДАРТИНФОРМ». 123995 Москва, Гранатный пер . 4 www.gostinlo ru info@goslinforu

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе «Национальные стандарты», а текст изменений и поправок — в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе «Национальные стандарты». Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования — на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

В Российской Федерации настоящий стандарт не может быть полностью или частично воспроизведен. тиражирован и распространен в качестве официального издания без разрешения Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии

Метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) с помощью жидкостной хроматографии

Meat and meat products. Method for determination of chloramphenicol (levomycetin) content using liquid chromatography

Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) в мышечной ткани мяса, включая мясо птицы, с помощью жидкостной хроматографии.

Данный метод применим для определения хлорамфеникола при его содержании более 6.5 мкг/кг.

Данный метод неприменим к испорченным образцам.

Для применения настоящего стандарта необходим следующий ссылочный документ. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного документа, для недатированных ссылок применяют последнее издание ссылочного документа (включая все его изменения).

ISO 3696:1987 Water for analytical laboratory use — Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Спецификация и методы испытаний)

В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

3.1 содержание хлорамфеникола в мясе и мясных продуктах: Содержание хлорамфеникола, измеренное в соответствии с методом, указанным в настоящем стандарте.

Примечание — Содержание хлорамфеникола выражают в микрограммах на килограмм.

Хлорамфеникол из части пробы для анализа экстрагируют водой. Экстракт фильтруют и полученный водный раствор очищают от липофильных компонентов методом твердофазной экстракции. Хлорамфеникол элюируют с экстракционного патрона дихлорметаном. Органический растворитель выпаривают и остаток очищают с помощью жидкостной экстракции в системе вода — толуол. Хлорамфеникол определяют методом обращенно-фазной хроматографии с детектированием в ультрафиолетовой (УФ) области спектра.

При отсутствии специальных указаний используют реактивы только официально признанной аналитической чистоты.

5.1 Вода, согласно требованиям ISO 3696, должна быть не ниже 3-й степени чистоты. Вода не должна содержать органические примеси.

5.2 Азот, пригодный для выпаривания растворителей.

5.5 Ацетатный буфер, c(CH₃C0₂Na) = 0,01 моль/дм\ pH = 4,3

Растворяют 0.82 г безводного ацетата натрия примерно в 970 см 3 воды. С помощью рН-метра (см. 6.1) доводят pH до 4.3 добавлением уксусной кислоты массовой долей 50 %. Переносят раствор в мерную колбу вместимостью 1000 см 3 . Доводят водой до метки и перемешивают.

5.6 Ацетонитрил для УФ спектроскопии.

К 250 см 3 ацетонитрила (см. 5.6) добавляют 750 см 3 ацетатного буфера (см. 5.5) и тщательно перемешивают.

Перед использованием элюент фильтруют через мембранный фильтр с размером пор 0.22 мкм (см. 6.2) и дегазируют.

5.8 Основной раствор хлорамфеникола массовой концентрации 100 мкг/см 1

Взвешивают 10 мг хлорамфеникола с точностью 0.1 мг и переносят в мерную колбу вместимостью

100 см 3 . Добавляют метанол до метки и перемешивают.

Приготовленный основной раствор стабилен в течение 1 мес при хранении в темноте.

5.9 Стандартные растворы хлорамфеникола

Пипеткой вносят 5,0 см 3 основного раствора (см. 5.8) в мерную колбу вместимостью 100 см 3 . Разбавляют водой до метки и перемешивают.

Разбавляют 1.0,2,0, 5,0 и 15,0 см 3 этого раствора до 100 см 3 для получения четырех стандартных растворов с массовой концентрацией хлорамфеникола соответственно 0,05; 0,10; 0,25 и 0,75 мкг/см 3 .

Эти стандартные растворы стабильны в течение одной недели при хранении в темноте.

Используют обычное лабораторное оборудование, в частности:

6.2 Мембранный фильтр с малым мертвым объемом и размером пор 0.22 мкм.

6.3 Механическое или электрическое устройство, пригодное для измельчения образца.

В качестве такого устройства могут быть использованы высокоскоростной ротационный куттер или мясорубка с решеткой, диаметр отверстий которой не превышает 4,0 мм.

6.4 Лабораторный гомогенизатор (например, гомогенизатор типа Стомахер или Вортекс) 1 *.

6.5 Фильтровальная бумага обеззоленная быстрофильтрующая диаметром примерно 15 см.

Примечание — Например, можно использовать Батман 41’).

Примечание — Можно использовать, например, картриджи Extrelut@ производства фирмы МегК. Дармштадт, Германии (Ne 11737)’>.

6.7 Водяная баня или нагревательный блок, позволяющие поддерживать температуру (40 г 1) ‘С, с устройством для выпаривания потоком азота (см. 5.2), или ротационный испаритель.

6.8 Центрифужные пробирки вместимостью 25 см 3 .

6.9 Смеситель для пробирок типа Вортекс. обеспечивающий частоту вращения примерно 700 мин” 1 .

Это примеры коммерчески доступной продукции. Данная информация приведена только для удобства пользователей настоящего стандарта и не является поддержкой разработчика.

6.10 Центрифуга, обеспечивающая радиальное ускорение примерно 1000 д.

6.11 Микропипетки вместимостью 300 мм 3 .

6.12 Жидкостной хроматограф, оборудованный:

— насосом постоянного потока;

— хроматографической колонкой внутренним диаметром 3 мм. длиной 20 см. заполненной обращенной фазой С8 или С18 с размером частиц 5 мкм, или другой колонкой с эквивалентными характеристиками;

— детектором УФ/ВИД, обеспечивающим измерение при длине волны 285 нм. если возможно — диодно-матричным детектором (используется для подтверждения обнаружения хлорамфенико-ла):

— самописцем с регулируемым диапазоном измерения или интегратором.

Отбор проб не является частью метода, изложенного в настоящем стандарте. Рекомендуемый метод отбора проб приведен в [1].

Очень важно, чтобы в лабораторию поступали представительные пробы, которые в процессе хранения и транспортирования не были испорчены или изменены.

От представительной пробы, поступившей в лабораторию, отбирают лабораторную пробу массой не менее 200 г. Пробу хранят в условиях, исключающих ее порчу и изменение состава.

Доводят температуру пробы до комнатной. Удаляют жировую ткань и несъедобные части пробы.

Измельчают лабораторную пробу с помощью устройства (см. 6.3). При этом следят за тем. чтобы температура пробы не превышала 25 °С. При использовании мясорубки пробу пропускают через нее не менее двух раз.

Приготовленную пробу помещают в герметично закрываемую емкость. Закрывают и хранят так. чтобы не допустить порчи и изменения ее состава.

При необходимости пробу хранят при температуре менее минус 18 °С.

Анализ пробы проводят как можно быстрее, но не позднее 24 ч после измельчения.

Примечание —Для контроля повторяемости результатов (см. 11.2) проводят два параллельных определения в соответствии с 9.1—9.6.

Параллельно с анализом раствора (или серии растворов), полученного из анализируемой пробы (или нескольких анализируемых проб), проводят анализ раствора, полученного из пробы, заведомо не содержащей хлорамфеникол (контрольная проба), и раствора, полученного из пробы, в которую добавлен хлорамфеникол в количестве 10 мкг/кг (контрольная проба с внесенным хлорамфениколом).

9.2 Подготовка части пробы для анализа

В конической колбе вместимостью 100 см 3 взвешивают 10 г (т) измельченной анализируемой пробы (см. раздел 8) с точностью 0,1 г.

9.3 Приготовление экстракта

Добавляют 40.0 см 3 воды и энергично перемешивают в течение 3 мин с помощью лабораторного гомогенизатора (см. 6.4).

Общий объем образующейся водной фазы (У,) равен 40.0 см 3 плюс объем воды, содержащейся в части пробы для анализа (обычно в 10 г пробы содержится примерно 7.5 см 3 воды).

Гомогенат фильтруют через бумажный фильтр (см. 6.5).

9.4 Вердофазная экстракция

Переносят 20 см 3 полученного фильтрата (V₂) в экстракционный патрон (см. 6.6).

Через (15 г 2) мин элюируют хлорамфеникол с помощью 70 см 3 дихлорметана (см. 5.3). Выпаривают органическую фазу до объема примерно 1 см 3 на водяной бане (см. 6.7) в слабом потоке азота (см. 5.2) или с помощью ротационного вакуумного испарителя (см. 6.7).

С помощью примерно 10 см 3 дихлорметана (см. 5.3) переносят остаток в центрифужную пробирку (см. 6.8).

Осторожно выпаривают досуха.

К остатку добавляют 400 мм 3 воды (У₃) и 2.0 см 3 толуола (см. 5.4) и перемешивают с умеренной интенсивностью в течение 1 мин на смесителе Вортекс (см. 6.9) счастотой вращения примерно 700 мин -1 . Центрифугируют в течение 5 мин на центрифуге (см. 6.10) с радиальным ускорением 1000 д. Пипеткой отбирают как можно больше органической фазы и отбрасывают ее.

Добавляют 1.5 см 3 толуола и перемешивают с умеренной интенсивностью в течение 1 мин на смесителе Вортекс (см. 6.9) с частотой вращения примерно 700 мин -1 .

Центрифугируют в течение 5 мин на центрифуге (см. 6.10) с радиальным ускорением 1000 д. Пипеткой отбирают как можно больше органической фазы и отбрасывают ее.

Микропипеткой (см. 6.11) переносят 300 мм 3 водной фазы в подходящий сосуд.

9.6 Хроматографический анализ

9.6.1 Условия хроматографирования

диапазон шкалы детектора. от 0,005 до 0,010 единиц оптической

плотности, что соответствует полной шкале самописца;

скорость бумаги самописца. 1,0 см/мин;

объемная скорость потока подвижной фазы (см. 5.7). . . 0.6 см 3 /мин;

объем анализируемого раствора, вводимый

(инжектируемый) в хроматограф. 100 мм*.

Примечание — Инжектируемый обьем и объемная скорость потока зависят от размеров колонки.

После стабилизации системы жидкостного хроматографа (см. 6.12) инжектируют растворы, полученные из контрольной пробы и контрольной пробы с внесенным хлорамфениколом, четыре стандартных раствора хлорамфеникола (см. 5.9). раствор, приготовленный из анализируемой пробы по 9.5, и снова стандартные растворы хлорамфеникола (см. 5.9).

На хроматограммах проб проверяют наличие сигнала на участке, соответствующем времени удерживания хлорамфеникола.

Измеряют высоты или площади хроматографических пиков хлорамфеникола для анализируемого раствора и стандартных растворов хлорамфеникола.

Содержание хлорамфеникола w. мкг/кг, в анализируемой пробе рассчитывают по формуле

где h — высота или площадь пика в единицах длины или площади, измеренные для анализируемого раствора;

h_s — высота или площадь пика, измеренные для одного из стандартных растворов (см. 5.9); р— содержание хлорамфеникола в стандартном растворе, мкг/см 3 ;

т — масса части пробы для анализа (см. 9.2), г;

V, — объем водной фазы, полученной после гомогенизации по 9.3. см 3 (V, = 40 см 3 + объем воды в пробе, взятой для анализа);

V₂— объем фильтрата (У₂ = 20 см 3 ), перенесенного по 9.4 в экстракционный патрон, см 3 ;

V₃— объем воды (V₃ = 400 мм 3 ), добавленной по 9.5 к сухому остатку, мм 3 .

Резупьтат вычислений округляют до 0,1 мкг/кг.

Результат испытаний нельзя корректировать на открываемость. Открываемость должна быть указана в протоколе испытаний (см. раздел 12).

11.1 Межлабораторные испытания

Точность метода была установлена с помощью межлабораторных испытаний, проведенных в соответствии с 12р>.

Резупьтаты этой межлабораторной проверки опубликованы в (5). Результаты этой проверки не могут быть распространены на области концентраций и матрицы, отличные от указанных в настоящем стандарте.

Результаты другой межлабораторной проверки, проведенной в соответствии с ISO 5725, показывают, что открываемость для мяса, мясных продуктов и мяса птицы воспроизводима и равна примерно

Абсолютное значение разности результатов двух независимых единичных испытаний, выполненных за короткий промежуток времени одним методом для одной идентичной анализируемой пробы в одной лаборатории одним оператором на одном и том же оборудовании, может превышать 2.1 мкг/кг не более чем в 5 % случаев при содержании хлорамфеникопа в образце 10 мкг/кг.

Абсолютное значение разности результатов двух независимых единичных испытаний, выполненных одним методом для идентичной анализируемой пробы в разных лабораториях разными операторами с испопьзованием разного оборудования, может превышать 4,9 мкг/кг не бопее чем в 5 % случаев при содержании хлорамфеникопа в образце 10 мкг/кг.

В протоколе испытания необходимо указать:

— информацию, необходимую для полной идентификации пробы;

— испопьзованный метод отбора проб (еспи известен);

— испопьзованный метод испытаний с указанием ссылки на настоящий стандарт;

— условия проведения анализа, не отраженные в настоящем стандарте или считающиеся неоднозначными. а также все имевшие место случаи, которые могут повлиять на результаты анализа;

— полученный результат анализа или два результата анализа, если проводилась проверка повторяемости;

Получение результатов по точности проводилось по ISO 5725:1986 (в настоящее время отменен).

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам

Таблица ДА.1 — Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам

Обозначение и наименование международного стандарта

Обозначение и наименование межгосударственного стандарта

ISO 3696:1987 вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний

* Соответствующий межгосударственный стандарт отсутствует. До его утверждения рекомендуется использовать переводив русский язык данного международного стандарта. Перевод данного международного стандарта находится в Федеральном информационном фонде технических регламентов и стандартов.

(1] ISO 3100-1:1991 Meat and meat products — Sampling and preparation of test samples — Part 1: Sampling (Мясо и

мясные продукты. Отбор образцов и подготовка проб. Часть 1. Отбор образцов)

(2] ISO 5725:1986 1 Precision of test methods — Determination of repeatability and reproducibility for a standard test

method by inter-laboratory tests (Точность методов испытаний. Определение повторяемости и воспроизводимости стандартного метода испытаний с помощью межлабораторных испытаний)

(3] ISO 5725-1:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 1: General

principles and definitions (Точность (правильность и прецизионность) методов измерений и результатов. Часть 1. Общие принципы и определения)

(4] ISO 5725-2:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results — Part 2: Basic method for

the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method (Точность (правильность и прецизионность) методов измерений и результатов. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений)

(5] Aerts M.L.. Keukens H.J.. Werdmuller G.A. Liquid Chromatographic Determination of Chloramphenicol Residues in Meat: Interlaboratory Study. JAOAC. 72 (4), 1989. pp. 570—576

Заменен на ISO 5725-1:1994. ISO 5725-2:1994. ISO 5725-3:1994. ISO 5725-4:1994. ISO 5725-5:1998. ISO 5725-6:1994.

источник

4.3. Требования техники безопасности при проведении испытаний

Помещение, в котором проводится определение хлорамфеникола, должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Все операции анализа необходимо проводить в вытяжном шкафу с использованием индивидуальных средств защиты.

4.4. Подготовка к испытанию

4.4.1. Приготовление растворов

Взвешивают 25 мг левомицетина, помещают в мерную колбу на 25 см и растворяют в метаноле, концентрация левомицетина 1 мг/мл. В мерную колбу на 25 см помещают 0,25 см полученного раствора и разбавляют метанолом до метки. Концентрация левомицетина в стандартном растворе 10 нг/мкл.

4.5. Проведение испытания методом ВЭЖХ

4.5.1. Подготовка образца для определения левомицетина в молоке

Смешивают 25 см молока с 12 г безводного сульфата натрия и экстрагируют (3 раза по 15 см этилацетата). Полученную смесь центрифугируют 15 мин со скоростью 4000 об./мин и декантируют. Этилацетатный слой промывают последовательно 5 см насыщенного раствора NaCl с добавлением в него 0,2 см 10% NaOH; 5 см насыщенного раствора NaCl с добавлением 0,2 см 10% СНСООН; 5 см насыщенного раствора NaCl. Органический слой отбирают и упаривают на ротационном испарителе (при 50 °С) до возможно минимального объема, отдувают азотом до исчезновения запаха органических растворителей, добавляют 3 см смеси ацетонитрил-вода (1:4) и экстрагируют 3 раза по 5 см петролейным эфиром. Петролейный эфир отбрасывают и извлекают левомицетин экстракцией этилацетатом (3 раза по 5 см). Этилацетатный слой упаривают досуха, растворяют в 0,1 см метанола.

4.5.2. Подготовка образца для определения левомицетина в мясе

Гомогенизируют 10 г мяса с 15 см фосфатного буфера (0,025 М KНРО + 0,025 М NaHPO) pH=6,88 и экстрагируют 3 раза по 30 см этилацетата. Полученную взвесь центрифугируют 15 мин при 4000 об./мин и декантиуют этилацетатный слой, промывают последовательно 5 см насыщенного раствора NaCl с добавлением 0,2 мл 10%-ного NaOH; 5 мл насыщенного раствора NaCl с добавлением 0,2 мл 10%-ного СНСООН и 5 см насыщенного раствора NaCl. Органический слой отбирают и упаривают на ротационном испарителе (при 50 °С) до возможно минимального объема, отдувают азотом до исчезновения запаха органических растворителей, добавляют 3 см смеси ацетонитрил-вода (1:4) и экстрагируют 3 раза по 5 см петролейного эфира, петролейный эфир отбрасывают и извлекают левомицетин экстракцией этилацетатом (3 раза по 5 см). Этилацетатный слой упаривают досуха, растворяют в 0,1 см метанола.

4.5.3. Подготовка образца для определения левомицетина в яйцах

Перетирают 10 г гомогената яйца с 5 г NaSO приливают 40 см этилацетата и 5 см 1Н HSO перемешивают и центрифугируют 5-10 мин при 4000 об./мин, этилацетатный слой декантируют, водную часть экстрагируют последовательно 30 и 20 см этилацетата, при необходимости применяя центрифугирование для расслоения. Объединенные этилацетатные слои промывают последовательно 10 см 2-процентного раствора NaCO насыщенного NaCl; 10 см насыщенного раствором NaCl.

4.6. Условия хроматографирования (ВЭЖХ)

В жидкостной хроматограф с колонкой (Ультрасфер ODS, С) 5 мкм (250х4,6 мм), УФ детектором при =278 нм, используя элюент ацетонитрил-вода-дециламин (40:60:0,1), вводят 5 мкл стандартного раствора (10 нг/мкл) левомицетина. В тех же условиях вводят метанольный экстракт образца (молока, мяса, яиц).

4.7. Подтверждение наличия левомицетина в образцах

Для подтверждения наличия левомицетина к 50 мкл метанольного экстракта приливают 50 мкл 10%-ного раствора KОН и нагревают 20 мин при 70 °С, 10 мкл полученного раствора вводят в тех же условиях в колонку жидкостного хроматографа. На полученной хроматограмме пик с временем удерживания левомицетина отсутствует. Это подтверждает наличие левомицетина в образце.

4.8.1. За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Окончательный результат округляют до второго десятичного знака.

Метрологические характеристики метода определения хлорамфеникола
в продуктах питания животного происхождения (молоке, мясе, яйцах)

источник

СТАЙЛАБ предлагает тест-системы для определения левомицетина (хлорамфеникола) в молоке в соответствии с ГОСТ Р 52842-2007 (ИСО 18330:2003), сухом молоке, масле, сыре, твороге, молочных продуках (кефире, сметане, йогурте, йогурте с фруктами), меде, пчелином маточном молочке, креветках, рыбной муке, мясе, яйцах по МУК 4.1.3535-18, сыворотке крови/плазме, моче, комбикормах, ферментах, вине и виноградном соке.

Иммунохроматографический метод анализа, тест-полоски

9268 Сухое молоко с содержанием хлорамфеникола 0,13 мкг/кг, 17 мл

9267 Сухое молоко с содержанием хлорамфеникола 0,34 мкг/кг, 17 мл

9269 Сухое молоко с содержанием хлорамфеникола менее 0,015 мкг/кг, 17 мл, для отрицательного контроля

S-4032 cтандарт хлорамфеникола SPEX

Чистые вещества и стандарты сульфаниламидов, нитроимидазолов, пенициллинов, амфениколов для анализа в соответствии с ГОСТ 54904-2012

Левомицетин (хлорамфеникол, хлоромицетин) – это антибиотик широкого спектра действия. Он обладает бактериостатическим действием и эффективен против возбудителей таких заболеваний, как дизентерия, брюшной тиф, пневмония, газовая гангрена, сибирская язва бактерий рода Yersinia (возбудители иерсиниоза, псевдотуберкулеза и чумы) и многих других опасных микроорганизмов. Хлорамфеникол очень хорошо растворяется в жирах и в значительных количествах выделяется с молоком. Его молекула имеет небольшие размеры, и это, вместе с жирорастворимостью, позволяет ему легко проникать во все ткани тела, в том числе, в мозг.

ВОЗ рекомендует использовать масляную суспензию хлорамфеникола в качестве первой линии терапии менингита в странах с низким уровнем дохода. В форме мазей для наружного использования он применяется при фурункулезе и других кожных заболеваниях, а также при ранениях. Многие лечат с помощью левомицетина пищевые токсикоинфекции («пищевые отравления»). Согласно источникам, хлорамфеникол проявляет активность в отношении некоторых крупных вирусов. При этом микроорганизмы очень медленно вырабатывают резистентность к нему, потому левомицетин остается очень эффективным антибиотиком.

В сельском хозяйстве и ветеринарии левомицетин применяется для лечения животных и птицы, больных желудочно-кишечными заболеваниями, в том числе, кокцидиозом, который вызывают паразиты. Также его используют для лечения заболеваний дыхательных путей.

Впервые хлорамфеникол выделили в 1947 году из культуры почвенного микроорганизма Streptomyces venezuelae. В клинической практике он используется с 1949 года. Позднее левомицетин научились синтезировать искусственным путем, и в настоящее время его получают именно таким способом.

В России хлорамфеникол входит в список жизненно необходимых и важнейших лекарственных препаратов и применяется в животноводстве и ветеринарии. В США левомицетин не выпускается для перорального употребления с 1991 года. В странах Евросоюза использование этого средства в животноводстве запрещено. Рекомендации применять хлорамфеникол только для лечения тяжелых заболеваний, запреты на его использование в животноводстве или необходимость контролировать содержание левомицетина в пищевых продуктах связаны с побочными эффектами этого средства, возникающими при хроническом воздействии на человека. Одним из таких эффектов являются реакции гиперчувствительности вплоть до анафилактического шока. Но чаще они выражаются в крапивнице и других кожных проявлениях, особенно при использовании мазей с левомицетином.

Левомицетин метаболизируется в печени с образованием глюкоронида хлорамфеникола – неактивного соединения. В этом виде он выводится почками. Хлорамфеникол ингибирует активность одного из ферментов печени, участвующего в обмене стероидов и некоторых других соединений, а также в нейтрализации токсичных веществ, что нарушает работу печени. В некоторых случаях левомицетин вызывать почечные кровотечения. Хлорамфеникол долгое время остается в организме животных и в пищевых продуктах, в том числе, в мясе и молоке.

Длительное употребление левомицетина в высоких дозировках может вызывать желудочно-кишечные расстройства, раздражение слизистых оболочек рта и желудочно-кишечного тракта, а также возникновение язв на них. Кроме того, он подавляет микрофлору кишечника, что часто приводит к расстройствам пищеварения или вторичной грибковой инфекции.

Самые опасные эффекты хронического употребления левомицетина связаны с его воздействием на кроветворную систему. Он вызывает апластическую анемию (атрофию кроветворения): неизлечимое заболевание, вызванное повреждением клеток костного мозга. При ней снижается количество всех трех типов клеток крови: лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов. Это редкое осложнение, и при употреблении левомицетина оно чаще всего возникает, если это средство применяли перорально. К другим осложнениям со стороны кроветворной системы относится подавление работы костного мозга, а также лейкемия («рак крови»). Чаще всего такая реакция возникает у детей, причем риск ее возникновения увеличивается с увеличением длительности употребления левомицетина.

Дозы левомицетина, способные вызывать побочные эффекты, в том числе, апластическую анемию, до сих пор не определены. Поэтому в странах Евросоюза использование левомицетина при производстве пищевых продуктов животного происхождения запрещено. Минимальный предел чувствительности методов анализа, с помощью которых в Евросоюзе допускается проводить определение левомицетина (хлорамфеникола) в пище составляет 0,3 мкг/кг.

Согласно гигиеническим требованиям к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, принятым в Российской Федерации и странах Таможенного Союза, в соответствии с Техническим Регламентом Таможенного Союза ТР ТС 021/2011 («О безопасности пищевой продукции») содержание левомицетина (хлорамфеникола) в яйцах, мясе и других продуктов не допускается (должно быть менее 0,01 мг/кг, или 10 мкг/кг). Такие же нормы установлены для молочных продуктов Техническим Регламентом Таможенного Союза ТР ТС 033/2013 «О безопасности молока и молочной продукции». С 1 июля 2015 года, согласно ТР ТС 033/2013, максимально допустимое содержание левомицетина в молоке не должно превышать 0,0003 мг/кг (0,3 мкг/кг), что соответствует также нормам Евросоюза. С актуальными законодательными нормативами можно ознакомиться на сайте compact24.com.

Остаточные количества левомицетина (хлорамфеникола) в пищевых продуктах можно определять методами радиоиммуного анализа и жидкостной хроматографии высокого давления. Однако данные методы реализуются на дорогостоящем оборудовании и занимают длительное время. Кроме того, радиоиммунный метод анализа предполагает использование радиоактивных материалов, а хроматографические методы требуют квалифицированного обслуживания и трудоемки. Микробиологические методы определения антибиотиков, в том числе, левомицетина, просты и дешевы, но недостаточно специфичны, поскольку многие микроорганизмы чувствительны к различным антибиотикам.

Для скрининга и в рутинной лабораторной практике широко применяют иммуноферментный метод анализа. Например, с сентября 1998 г. в Германии ИФА является официальным методом скрининга остатков левомицетина в молоке; см.§ 35 LMBG, 01.00 68. В Белоруссии утверждены МУК 10-1-5/118/В от 18.08.2003 по контролю левомицетина в молоке, сухом молоке, яйцах и мясе с помощью тест-системы RIDASCREEN® Chloramphenicol. В России метод иммуноферментного анализа для определения левомицетина в пищевых продуктах утвержден МУК 4.1.1912-04.

источник

Сотрудниками РУП «Научно-практический центр гигиены» разработана новая сверхчувствительная методика определения содержания остаточных количеств левомицетина в сырье животного происхождения и пищевых продуктах методом ВЭЖХ/МС–МС.

Ее чувствительность составляет 0,2 мкг/кг.

Среди ряда веществ, контаминирующих продовольственное сырье и пищевые продукты, особое место занимают антибиотики. Данные вещества применяются при лечении больных животных, используются в качестве кормовых добавок и препаратов для стимуляции роста. Остаточные количества антибиотиков часто обнаруживают в молоке и молочных продуктах, в пищевых продуктах животного происхождения вследствие нарушения режима профилактики и лечения животных, а также в результате несоблюдения времени выдержки перед забоем.

Наличие антибиотика в пищевом сырье может изменить ход технологического процесса и повлиять на качество выпускаемой продукции. Кроме того, антибиотики могут специально вноситься в молоко производителями (фальсификация антибиотиками) для предотвращения преждевременного его скисания. Далее с продуктами питания они могут поступать в организм человека и оказывать неблагоприятное влияние на здоровье. Длительное использование в пищу продуктов, содержащих остаточное количество антибиотиков, может приводить к неблагоприятным для человека последствиям: возникновению аллергических реакций, дисбактериозов, анафилактического шока, увеличению антибиотикоустойчивости микрофлоры в организме, что впоследствии затрудняет выбор антибактериальных препаратов для лечения различных воспалительных заболеваний. Одним из таких антибиотиков является левомицетин.

Для экспортирования продукции за рубеж необходимо соблюдать требования международного ветеринарного кодекса и директив ЕС относительно выполнения ветеринарно-санитарных норм и правил при выращивании, производстве, переработке, хранении, транспортировании и реализации продукции. По этим причинам использование антибиотиков должно находиться под строгим санитарно-ветеринарным и гигиеническим контролем. Методы, применяемые для контроля наличия данных препаратов в продовольственном сырье и пищевых продуктах, можно разделить на микробиологические, физико-химические и иммунологические. Микробиологические методы (агародиффузный «чашечный» метод) определения основаны на измерении диаметра участков торможения роста бактерий, чувствительных к данному антибиотику (зон ингибиции). Эти методы являются сравнительно простыми и дешевыми, однако отличаются недостаточной чувствительностью, специфичностью и воспроизводимостью результатов.

Предпочтительным для контроля продовольственного сырья является иммуноферментный метод анализа, который обладает высокой чувствительностью, точностью, специфичностью, быстротой проведения анализа. Для определения левомицетина используют тест-системы типа «Ридаскрин Хлорамфинекол» и «МАХ SIGNAL Хлорамфинекол». Чувствительность этих методов в зависимости от анализируемого продукта составляет 0,01–0,25 мкг/кг (яйца, молоко, рыба, мясо). Данный метод широко используется для проведения скрининговых исследований. В случае установления фактов отсутствия антибиотиков в сырье с помощью иммуноферментного метода, обнаружение их в готовой продукции исключено. Недостатком указанного метода является то, что в настоящее время он не применим для готовой продукции. Это связано с тем, что производимые за рубежом тест-системы предназначены только для определения антибиотиков в продовольственном сырье, так как нормирование антибиотиков в странах Евросоюза проводится по сырью. Еще один недостаток — большой процент ложноположительных результатов. В случае получения положительного отклика, наличие антибиотика или его отсутствие в анализируемой продукции необходимо подтверждать другими методами анализа.

Методы высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) со спектрофотометрическим детектированием также используются для контроля содержания остаточных количеств левомицетина и его метаболитов в продовольственном сырье и пищевых продуктах. Однако чувствительность данных методов недостаточно велика и составляет 6,5—10,0 мкг/кг.

Также следует отметить, что ни один из вышеперечисленных методов не распространяется на пищевые продукты для детского и специализированного питания (для беременных и кормящих женщин, диетическое, спортивное), БАДы и пищевые добавки, содержащие продукты животноводства.

В странах Европы, Японии, США содержание хлорамфеникола регламентируется на уровне минимальной чувствительности метода, которая составляет 0,3 мкг/кг. В Беларуси в соответствии с требованиями СанПиГН до недавнего времени наличие левомицетина в мясе, мясных изделиях, молоке и молочных продуктах, продуктах для детского питания также не допускалось в пределах применяемого метода определения. В связи с введением в действие технического регламента Таможенного союза (ТР ТС 033/2013) содержание левомицетина в продуктах питания было четко регламентировано. Так, в сыром молоке, сыром обезжиренном молоке, сырых сливках и во всей молочной продукции содержание левомицетина (хлорамфеникола) не допускается более 0,01 мг/кг, а для продукции детского питания на молочной основе установлены еще более жесткие нормативы, при которых содержание левомицетина (хлорамфеникола) не должно превышать допустимого уровня 0,0003 мг/кг.

В настоящее время высокоточным аналитическим методом контроля антибиотиков является метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (далее — ВЭЖХ/МС–МС). Этот метод позволяет качественно и количественно определять остаточное количество антибиотиков как в сырье, так и в готовой продукции. Кроме того, с помощью указанного метода возможно разделение и идентификация различных действующих веществ, относящихся к одной группе. Данный метод имеет хорошую воспроизводимость и надежность, а также позволяет обнаруживать левомицетин в продукции животноводства на уровне 0,2 мкг/кг. По этой причине ВЭЖХ/МС–МС признан арбитражным методом определения антибиотиков в сырье и продукции животноводства в странах Евросоюза и России. Однако в Республике Беларусь метод ВЭЖХ/МС–МС для определения антибиотиков не применялся из-за отсутствия метрологически аттестованной методики.

Учитывая все вышесказанное, возникла необходимость разработки унифицированной методики определения остаточных количеств левомицетина во всех группах пищевых продуктов, в составе которых используется животноводческое сырье, методом ВЭЖХ/МС–МС, который бы соответствовал санитарно-гигиеническим требованиями Республики Беларусь, Таможенного союза и Евросоюза.

Сотрудниками Научно-практического центра гигиены разработана и внедрена в практику методика, которая позволяет контролировать содержание остаточных количеств левомицетина в различных видах пищевой продукции на уровне 0,2 мкг/кг. Метод определения основан на извлечении левомицетина органическим растворителем, очистке экстракта методом твердофазной экстракции и хроматографическом разделении с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в обращенно-фазовом варианте с масс-спектрометрическим детектированием.

В настоящее время проводится определение содержания остаточных количеств левомицетина методом ВЭЖХ/МС–МС в сырье и продукции животноводства, а также в продуктах для детского питания на мясной и молочной основе. Внедрение данного метода позволило успешно вести контроль безопасности продукции, производимой на территории Беларуси, ввозимой из-за рубежа, а также предназначенной для поставки на экспорт.

Методика метрологически аттестована в БелГИМ и утверждена должным образом МВИ МН 4790–2013 «Определение содержания остаточных количеств левомицетина в сырье животного происхождения и пищевых продуктах методом ВЭЖХ/МС–МС».

Е. ШУПИЛОВА, научный сотрудник; О. ШУЛЯКОВСКАЯ, кандидат химических наук, заведующая лабораторией химии пищевых продуктов РУП «Научно-практический центр гигиены»

источник

Левомицетин в мясе метод определения

ГОСТ Р ИСО 13493-2005 Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) с помощью жидкостной хроматографии

Текст ГОСТ Р ИСО 13493-2005 Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) с помощью жидкостной хроматографии

ГОСТ ISO 13493-2014 Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) с помощью жидкостной хроматографии

Meat and meat products. Method for determination of chloramphenicol (levomycetin) content using liquid chromatography

ГОСТ ISO 13493-2014
Мясо и мясные продукты. Метод определения содержания хлорамфеникола (левомицетина) с помощью жидкостной хроматографии