Меню Рубрики

Спектрофотометрическое определение левомицетина в водном растворе

Для проведения аналитического контроля и заключения о качестве лекарственного вещества и возможных лекарственных форм:

бел. крист. пор. со слаб. желтов-зел. отт. кр. пор., б/з , горьк. вкуса, м.р. в воде, л.р, в спирте.

Антибиотик ароматического ряда. Производное хлорамфеникола. Сп. Б

Применяется от брюшного тифа, бруцеллёза, сальманелиоза, гангрены, пневмонии

Мол-ла левомецетина включ. 2 асимметричных атома углерода, п/э возможно существование 4 простых изомеров : Д-трео, α-трео, Д-эритро, α-эритро.

Подлинность (чистота):

1. опт. акт-ть – исп. коэф. уд-го вращения. Активно поглощает свет и имеет

3. спектрофотометрия при λ=278 нм

4. кислотность (добавляют спирт, нейтрализованный по ФФ, перемешивают, фильтруют – должна появлятся розовая окраска после одной капли 0,1 М NaOH).

5. ТБ пост. примеси ТСХ не более 3х дополнительных пятен. Сульфатная зола, тяжелые металлы – в субстанции и ЛФ.

Содержит функциональные гр: Ar нитрогруппу, ковалентно связанный Hal, спиртовый гидроксил

Качественные реакции:

1. Гидролиз в щелочной среде.

Осадок отфильтровывают, затем:

NaCl + AgNO3 AgCl¯ + NaNO3

2. Раствор левомицетина в спирте вращает плоскость поляризации света влево

3. Таб, капсулы: УФ СФМ при 230-250 нм.

1. Образование медного комплекса.

2. Образование азокрасителя с бета-нафтолом после восстановления аминогруппы цинков в кислой среде

Количественное определение:

а. Нитритометрия (после восстановления NH2 группы).

Навеску + HCl + Zn – охлаждают, титруют NaNO2 с KBr. Индикатор – йод-крахмальная бумага.

2 KI + 2NaNO2 + 4HCl à I2 + 2NO + 2NaCl + 2KCl + 2H2O f=1

б. УФ СФМ в водном растворе.

1. Куприметрия прямая. Мурексидная индикаторная смесь. Титрант: CuSO4. Титруют до перехода окраски от фиолетово к коричнево-красной. f=2.

2 Левомицетина + CuSO4 à (Левомицетин)2Cu + H2SO4

2Левомицетина + CuSO4 + 4NaOH à (Левомицетин) 2Cu + Na2SO4 + 4H2O

CuSO4изб + 2NaOH à Cu(OH)2¯ + Na2SO4 (отфильтровывают осадок)

(Левомицетин)2Cu + H2SO4 разб à 2Левомицетина + CuSO4

2CuSO4 + 4KI à Cu2I2 + 2K2SO4 + I2

I2 + 2Na2S2O3 à 2NaI + Na2S4O6

, F=2

3. Аргентометрия по Фольгарду.

Левомицетин + H2O2 + 2 NaOH à 2 NaCl + …

Минерализуют при кипячении в течении 1 часа; затем подкисляют HNO3, добавляют избыток AgNO3. Титруют роданидом аммония с индикатором квасцами. F=1/2

4. Меркуриметрия. Минерализация таким же образом, подкисляют HNO3, титруют нитратом ртути 2 с дифенилкарбазоном. Фактор=1/2

5. УФ СФМ в составе комплексных ЛФ (РСО готовят из субстанции левомицетина).

6. ФЭК по реакции азосочетания.

Хранение: Список Б (сильнодействующее), ХУТ оранжевого стекла в темном сухом месте.

Лек. формы: таблетки 0,25 и 0,5; капс. с лев-м 0,25 и 0,5; гл. капли 0,25% на изотонич. р-ре NaCl либо 2% бром. к-ты

Не нашли то, что искали? Воспользуйтесь поиском:

Лучшие изречения: Увлечёшься девушкой-вырастут хвосты, займёшься учебой-вырастут рога 9507 — | 7529 — или читать все.

195.133.146.119 © studopedia.ru Не является автором материалов, которые размещены. Но предоставляет возможность бесплатного использования. Есть нарушение авторского права? Напишите нам | Обратная связь.

Отключите adBlock!
и обновите страницу (F5)

очень нужно

источник

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для стандартизации и контроля качества лекарственных средств. Сущность способа: готовят растворы определяемого вещества и стандартного образца свойств. В качестве растворителя для приготовления испытуемых растворов используют 0,1 М раствор натрия гидроксида, а в качестве стандартного образца — хромат калия. Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора и раствора стандартного образца хромата калия на спектрофотометре. Расчет результатов количественного определения проводят по формуле, вводя в нее коэффициент пересчета. Способ позволяет повысить воспроизводимость результатов определения и уменьшить погрешность анализа.

Предполагаемое изобретение относится к области медицины и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях для стандартизации и контроля качества лекарственных средств.

Актуальным вопросом здравоохранения является контроль за качеством выпускаемых лекарственных средств. Эффективность контроля качества лекарственных препаратов, а также проведение их всестороннего изучения обеспечивается внедрением в практику фармацевтического анализа современных физико-химических методов, среди которых важное место занимает спектрофотометрия в УФ-области.

Объектами настоящего исследования являются антибиотики группы хлорамфеникола, применяемые для лечения кишечных инфекций и гнойно-воспалительных заболеваний кожи и слизистых оболочек — левомицетин и синтомицин.

Известен способ титриметрического определения левомицетина и синтомицина, заключающийся в восстановлении ароматической нитрогруппы до аминогруппы в присутствии концентрированной кислоты хлористоводородной и цинковой пыли с последующим их нитритометрическим определением /ФС 42-5050-95 «Левомицетин», ФС 42-2317-92 «Синтомицин»/.

Наиболее близким и принятым нами за прототип является способ спектрофотометрического определения таблеток левомицетина, заключающийся в приготовлении водно-спиртовых растворов испытуемого вещества и рабочего стандартного образца (РСО) левомицетина с последующим их фотометрированием при длине волны 278 нм и расчетом результатов по РСО левомицетина с учетом его фактического содержания в серийном препарате. /ФС 42-3679-98 «Таблетки левомицетина по 0,25 и 0,5г.»/
Рекомендованный нормативно-технической документацией нитритометрический метод количественного определения левомицетина и синтомицина длителен, трудоемок и недостаточно воспроизводим. Относительная погрешность определения составляет 6,58%. В связи с этим был предложен спектрофотометрический способ количественного определения субстанций левомицетина и синтомицина. Для избежания погрешности градуировки и повышения точности анализа в спектрофотометрии используют стандартные образцы. Так как государственные стандартные образцы левомицетина и синтомицина отсутствуют, а выпуск их является дорогостоящим и малодоступным для многих лабораторий, возникла необходимость использования стандартных образцов свойств.

Техническим результатом предлагаемого способа является повышение воспроизводимости результатов определения и уменьшение погрешности анализа.

Технический результат достигается путем приготовления раствора определяемого вещества и стандартного образца свойств с последующим их спектрофотометрированием и расчетом результатов.

Новым в достижении технического результата является то, что в качестве растворителя для приготовления испытуемых растворов используют 0,1 М раствор натрия гидроксида.

Новым является и то, что в качестве стандартного образца используют хромат калия, вводя в формулу расчета результатов коэффициент пересчета.

Изучаемые вещества изменяют спектр поглощения в зависимости от рН среды. Исходя из значений констант ионизации и свойств левомицетина и синтомицина авторы доказали, что оптимальным растворителем для их спектрофотометрического определения является 0,1 М раствор натрия гидроксида. Оптимальный растворитель обеспечивает стабилизацию испытуемых растворов, что повышает воспроизводимость результатов определения и уменьшает погрешности анализа.

В данном растворителе спектры поглощения левомицетина и синтомицина характеризуются максимумом поглощения при 280 нм.

Исходя из установленной авторами зависимости, согласно которой в качестве стандартных образцов свойств могут применяться вещества, для которых интервал между аналитической длиной волны и максимумом (или минимумом) поглощения этого стандартного образца не превышает половины полуширины его полосы поглощения, в качестве стандартного образца в предлагаемом способе используют хромат калия, так как оптимальные области поглощения, в которых его можно использовать как стандартный образец свойств 264-286, 357-386 нм. Хромат калия выпускается серийно промышленностью как химически чистое вещество, имеется ГОСТ, регламентирующий его качество (ГОСТ 4459-75), раствор хромата калия устойчив в оптимальном растворителе длительное время. Использование хромата калия в предлагаемом способе приводит к уменьшению погрешности анализа.

Сопоставительный анализ показывает, что заявляемое техническое решение отличается тем, что в качестве растворителя для приготовления испытуемых растворов используют 0,1 М раствор натрия гидроксида, а в качестве стандартного образца — хромат калия, вводя в формулу расчета результатов коэффициент пересчета, что соответствует критерию изобретения «новизна».

Новая совокупность признаков обеспечивает повышение воспроизводимости результата определения, уменьшение погрешности анализа, а также позволяет снизить стоимость и уменьшить время анализа, что соответствует критерию «промышленная применимость».

При анализе известных решений было выявлено, что в них отсутствуют сведения о влиянии отличительных признаков на достижение поставленного технического результата, следовательно, изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Способ осуществляют следующим образом.

Готовят раствор стандартного образца хромата калия. Для этого точную массу хромата калия (0,1500 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 0,1 М растворе натрия гидроксида и доводят раствор до метки этим же растворителем, перемешивают. 1 мл приготовленного раствора хромата калия помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят 0,1 М раствором натрия гидроксида до метки, перемешивают. Затем проводят количественное определение левомицетина и синтомицина в субстанции. Для этого точную массу препарата (0,0500г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в горячей воде, охлаждают и доводят этой водой до метки, перемешивают. 2 мл приготовленного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят 0,1 М раствором натрия гидроксида до метки, перемешивают. Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора при длине волны 280 нм относительно 0,1 М раствора натрия гидроксида на спектрофотометре в кювете с длиной рабочего слоя 10 мм. Параллельно измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца хромата калия при длине волны 280 нм относительно 0,1 М раствора натрия гидроксида на спектрофотометре в кювете с длиной рабочего слоя 10 мм.

Расчет результатов количественного определения проводят по формуле:

D и D ст — оптические плотности определяемого вещества и стандартного образца соответственно;
a и a ст — точные навески определяемого вещества и стандартного образца соответственно;
100 — коэффициент для пересчета в проценты;
k пер — коэффициент пересчета, который рассчитывается следующим образом:

удельный показатель поглощения стандартного образца хромата калия при 280 нм;
E 1% 1см c.в. — удельный показатель поглощения стандартного образца лекарственного вещества при 280 нм (определяется при разработке методики);
k пер для левомицетина -0,615, k пер — для синтомицина -0,615.

Содержание левомицетина должно быть 98,0-102% в пересчете на сухое вещество. Синтомицина в пересчете на сухое вещество должно быть не менее 99%.

Предлагаемый способ поясняется следующими примерами. Готовят растворы испытуемого образца и стандартного вещества выше описанным способом. Измеряют на спектрофотометре оптические плотности приготовленных растворов. Далее ведут расчет результатов по формуле, используя коэффициент пересчета.

При определении левомицетина получили следующие результаты: D = 0,58, D ст = 0,54, a = 0,0498, a ст = 0,1500, влажность 0,1%, = 99,58%. При n=6, S=0,141, Р=95%/, А%=0,15.

При определении синтомицина получили следующие результаты: = 0,60, D ст = 0,55, a = 0,0504, a ст = 0,1497, влажность 0,19%, = 99,83%. При n=6, S=0,356, /Р=95%/, А%=0,37.

Данные примеры подтверждают, что содержание левомицетина и синтомицина соответствует требованиям нормативного документа. Предлагаемый способ с использованием стандартного образца хромата калия оказался оптимальным и для количественного определения синтомицина в свечах, левомицетина в таблетках, глазных каплях и спиртовом растворе, а также позволил с достаточной точностью провести контроль теста «растворения» таблеток левомицетина.

Методика количественного определения синтомицина в свечах и левомицетина в таблетках, глазных каплях и спиртовом растворе отличается от методики количественного определения синтомицина и левомицетина в субстанциях только приготовлением испытуемого раствора.

Для количественного определения левомицетина в таблетках по 0,25 и 0,5 г берут точную массу порошка (0,0500 г) растертых таблеток левомицетина, количественно переносят с помощью горячей воды в мерную колбу вместимостью 100 мл, взбалтывают в течение 15 мин, охлаждают, доводят объем раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 15-20 мл фильтрата. 2 мл полученного фильтрата переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора 0,1 М раствором натрия гидроксида до метки, перемешивают.

Содержание левомицетина в таблетках по 0,25г должно быть 0,238-0,262 г, в таблетках по 0,5 г — 0,475-0,525 г.

Количественное определение левомицетина в таблетках поясняется следующими примерами. При анализе таблеток левомицетина по 0,25 г получены результаты: D = 0,525, D ст = 0,53, a = 0,0501, a ст = 0,1500, Р ср = 0,2767, = 0,252. При анализе таблеток левомицетина по 0,5 г получены результаты: D = 0,53, D ст =0,541, a = 0,0501, а ст =0,1503, P ст =0,5456, = 0,493.
Данные примеры подтверждают, что содержание левомицетина в таблетках соответствует требованиям нормативного документа.

Для количественного определения левомицетина в 0,25% глазных каплях объем лекарственной формы 2 мл помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора водой до метки, перемешивают. 5 мл приготовленного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора 0,1 М раствором гидроксида натрия до метки, перемешивают. Содержание левомицетина в 0,25% глазных каплях должно быть 0,24-0,26%.

При анализе левомицетина в 0,25% глазных каплях получены результаты: D = 0,585, D ст ,=0,54, a ст =0,1500, = 0,2498%.
Для количественного определения левомицетина в растворе левомицетина спиртовом 3% объем лекарственной формы 2 мл помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки, перемешивают. 2 мл приготовленного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора 0,1 М раствором гидроксида натрия до метки, перемешивают.

Содержание левомицетина в растворе левомицетина спиртовом 3% должно быть 2,7-3,3%.

При анализе левомицетина в растворе левомицетина спиртовом 3% получены результаты: D = 0,68, D ст =0,52, а ст =0,1500, ==3,02%.
Данные примеры подтверждают, что содержание левомицетина в глазных каплях и спиртовом растворе соответствует требованиям нормативного документа.

Для количественного определения синтомицина в суппозиториях вагинальных по 0,25 г 1 суппозиторий помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, добавляют 40-50 мл горячей воды, тщательно встряхивают и нагревают на водяной бане до полного растворения основы и высвобождения действующего вещества. Охлаждают и доводят объем водой до метки, перемешивают. Раствор фильтруют через бумажный фильтр, первые 30-40 мл фильтрата отбрасывают, затем 2 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят 0,1М раствором гидроксида натрия до метки, перемешивают. Содержание синтомицина в суппозиториях вагинальных с синтомицином по 0,25 г должно быть 0,24-0,26 г.

При анализе синтомицина в суппозиториях вагинальных получены результаты: D = 0,58, D ст =0,53, a ст =0,1503, = 0,253 г.
Данный пример подтверждает, что содержание синтомицина в суппозиториях вагинальных с синтомицином по 0,25 соответствует требованиям нормативного документа.

Для контроля теста растворения таблеток левомицетина за основу брали унифицированную методику (ГФ XI изд., с.159-160). В качестве среды растворения использовали 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной, время растворения — 30 мин, объем среды — 1000 мл, скорость вращения — 100 об/мин, температура (371) o С. При анализе таблеток левомицетина по 0,25 г и 0,5 г в корзинку помещают одну таблетку, через 30 минут вращения отбирают пробу. Раствор фильтруют, 10 мл фильтрата (при анализе таблеток по 0,25г) и 5 мл фильтрата (при анализе таблеток по 0,5 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем 0,1М раствором гидроксида натрия до метки, перемешивают.

Согласно ГФ XI изд.с.159-160 в среду растворения должно перейти не менее 75% действующего вещества от содержания в лекарственной форме.

При анализе таблеток левомицетина по 0,25 г высвобождение действующего вещества составило 97,1; 95,9; 94,5; 99,8; 98,5% для пяти таблеток соответственно.

При анализе таблеток левомицетина по 0,5 г высвобождение действующего вещества составило 95,7; 93,4; 94,0; 97,8; 99,2% для пяти таблеток соответственно.

Таким образом, предлагаемый способ определения лекарственных средств антибиотиков группы хлорамфеникола с использованием стандартного образца свойств позволяет повысить воспроизводимость результатов определения, уменьшить погрешность анализа, снизить его стоимость и унифицировать методики анализа.

Способ определения антибиотиков группы хлорамфеникола с использованием стандартного образца свойств путем приготовления растворов определяемого вещества и стандартного образца свойств с последующим их спектрофотометрированием и расчетом результатов, отличающийся тем, что в качестве растворителя для приготовления испытуемых растворов используют 0,1 М раствор натрия гидроксида, а в качестве стандартного образца — хромат калия, вводя в формулу расчета результатов коэффициент пересчета.

источник

Описание:Таблетки белого цвета или белого со слабым желтоватым оттенком.

Подлинность:К0,1 г порошка растертых таблеток прибавляют 5 мл раствора едкого натра и нагревают; появляется желтое окрашивание, переходящее при дальнейшем нагревании в красно-оранжевое. При кипячении раствора окраска усиливается, выделяется кирпично-красный осадок, выделяется аммиак, обнаруживаемый по посинению красной лакмусовой бумаги.

Средняя масса таблетки:В соответствии с требованиями ГФ XI, вып. 2, с. 154.

Количественное определение:Около 0,12 г (точная навеска) порошка растертых таблеток помещают в мерную колбу емкостью 1 л, прибавляют при перемешивании 500 мл воды, слегка нагревают, доводят объем раствора водой до метки, хорошо перемешивают и дают раствору отстояться. 10 мл раствора (прозрачного) переносят в мерную колбу емкостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и измеряют оптическую плотность полученного раствора в кювете с толщиной слоя 1 см на спектрофотометре при 278 нм.

Содержание левомицетина в одной таблетке в граммах вычисляют по формуле:

,

где: А – оптическая плотность испытуемого раствора; а – навеска в граммах; V1 и V2 – объемы колб, используемых для приготовления растворов, в мл; Va – объем аликвоты, отбираемой для приготовления раствора, в мл; Р – средняя масса таблетки , в граммах; — удельный показатель поглощения Левомицетина при длине волны 278 нм; l – толщина слоя кюветы, в см;

Содержание левомицетина в одной таблетке должно быть 0,095 – 0,0105 г; 0,238 – 0,262 г или 0,475 – 0,525 г, считая на средний вес одной таблетки.

Контрольные вопросы и задачи к занятиям 1-3.

1.Как можно классифицировать антибиотики? Какие Вам известны способы получения антибиотиков? Поясните на примерах.

2.Дайте общую характеристику биологическим методам определения активности антибиотиков. Что означает единица действия (ЕД)?

3.Напишите структурные формулы природных и полусинтетических пенициллинов. Укажите функциональные группы. Напишите латинские названия этих лекарственных веществ. На основании химической структуры объясните их различную растворимость.

4.Напишите структурные формулы цефалоспоринов. Укажите функциональные группы. Напишите латинские названия этих лекарственных веществ.

5.Охарактеризуйте кислотно-основные свойства ампициллина, феноксиметилпенициллина, цефалексина. Подтвердите свои выводы химическими реакциями.

6.На примере феноксиметилпенициллина приведите уравнение химической реакции образования гидроксамата меди. Какой из препаратов пенициллинов эту реакцию не дает и почему?

7.Назовите частные реакции на соли бензилпенициллина, феноксиметилпенициллина, ампициллина, амоксициллина. Объясните, чем они обусловлены и как используются в анализе? Какие из продуктов окрашены? Напишите уравнения химических реакций.

8.Напишите общую реакцию на лекарственные средства группы β-лактамидов. Чем она обусловлена? Приведите условия ее выполнения и использования в анализе.

9.На основании химической структуры цефалексина и цефалотина приведите химические испытания для определения их подлинности. Чем они обусловлены? Напишите уравнения реакций.

10.Охарактеризуйте сущность гравиметрического метода определения бензилпенициллина в его солях. Напишите уравнения реакций.

11.Перечислите все реакции на остаток стрептозы в молекуле стрептомицина. В каких условиях можно открыть остаток стрептозы и остаток N-метил-L-глюкозамина с реактивами, характерными для альдегидной группы? Напишите уравнения реакций.

12.На чем основано использование ФЭК и спектрофотометрии в количественном определении аминогликозидов. Напишите уравнения на примере стрептомицина сульфата и канамицина моносульфата.

13.Напишите структурные формулы хлорамфеникола и его эфиров. Укажите основные функциональные группы. Приведите реакции подлинности хлорамфникола и его эфиров.

14.Приведите возможные методы количественного определения хлорамфеникола и его эфиров. Напишите химические реакции процессов, происходящих при этом. Укажите титр и молярную массу эквивалента.

15.Методы синтеза левомицетина. Как происходит разделение изомеров левомицетина при его синтезе?

16.0,1086 г феноксиметилпенициллина растворили в 4 мл 5% раствора натрия гидрокарбоната в мерной колбе вместимостью 500 мл и довели объем раствора до метки водой. Оптическая плотность полученного раствора составляет 0,740 при длине волны 286 нм и толщине слоя 10 мм. Рассчитайте удельный показатель поглощения феноксиметилпенициллина.

17.В бензилпенициллине натриевой соли сумма пенициллинов составляет 94,5%. Рассчитайте объем раствора йода (0,01 моль/л) УЧ(1/2 J2) с К 1,0000, который свяжется с навеской лекарственного вещества 0,0602 г. Навеску растворили в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл, довели объем раствора водой до метки и на анализ взяли 5 мл полученного разведения. Величина эквивалента в г стандартного образца бензилпенициллина при 20 0 С составляет 0,0004055г.

18.При количественном определении бензилпенициллина калиевой соли по ФС на контрольный опыт израсходовано 19,8 мл 0,01 М раствора тиосульфата натрия, на титрование испытуемого препарата — 14,3 мл того же титранта (К=0,99). каково содержание (%) препарата, если Т = 0,0004055 г/мл, а = 0,0503г, С = 1,045?

19.При количественном определении по ФС бензилпенициллина калиевой соли с массой 0,0600 г затрачено 6 мл 0,01 М раствора иода (К=1,0, Т=0,0004055 г/мл, С=1,045). Каково содержание (%) препарата?

20.Приведите уравнения реакций количественного определения суммы пенициллинов в бензилпенициллина натриевой соли и бензилпенициллина калиевой соли методом йодометрии. Рассчитайте коэффициенты для пересчета величины эквивалента стандартного образца натриевой соли (М = 356,38 г/моль) на бензилпенициллина калиевую соль (М = 372, 49 г/моль) и бензилпенициллина новокаиновую соль (М = 588,7 г/моль)с точностью до третьей значащей цифры после запятой.

21.Рассчитайте содержание калиевой соли бензилпенициллина во флаконе в % и ЕД (масса препарата во флаконе 0,6021), если навеску массой 0,06024 г поместили в мерную колбу вместимостью 100,0 мл, довели водой до метки. К аликвоте объемом 5,0 мл добавили наряду с другими необходимыми реактивами 20,0 мл 0,01 моль/л (УЧ ½ J2) раствора йода (К=0,98). На титрование избытка указанного титрованного раствора пошло 12,5 мл 0,01 моль/л раствора натрия тиосульфата (К=1,02) На титрование контрольного опыта пошло 19,2 мл того же титранта. Анализ проводили при температуре 20 0 С. 1ЕД соответствует 0,0005988 мг химически чистой натриевой соли бензилпенициллина.

22.Рассчитайте содержание левомицетина в субстанции, если при его количественном определении на навеску массой 0,4987 г затрачено 15,3 мл 0,1 М раствора натрия нитрита, К = 1,01.

23.Рассчитайте объем титрантов, который израсходуется при количественном определении навески левомицетина массой 0,2510 г методами нитритометрии, куприметрии и аргентометрии.

24.Рассчитайте содержание левомицетина в водном растворе (в %), если при спектрофотометрическом измерении оптическая плотность раствора составила 0,56, а измерение проводили в кювете с толщиной слоя 10 мм. Удельный показатель поглощения левомицетина равен 295.

Дата добавления: 2016-10-23 ; просмотров: 683 | Нарушение авторских прав

источник

Владельцы патента RU 2431829:

Группа изобретений относится к концентрированию и определению антибиотика левомицетина в пищевых продуктах методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Сущность изобретения: левомицетин экстрагируют из пробы ацетонитрилом, отделяют на центрифуге раствор, в котором находится антибиотик, к центрифугату добавляют сорбент — вермикулит при массовом соотношении вермикулита, равном 0,1 г сорбента на 1 г жира в пробе, и встряхивают в течение 30 минут, затем раствор отделяют и пропускают через смесь сорбентов — активированного угля и вермикулита, взятых в массовом соотношении, равном 1:1, и промывают дистиллированной водой, элюируют левомицетин этанолом, элюат упаривают досуха на водяной бане и охлаждают до комнатной температуры, затем остаток растворяют в подвижной фазе (ацетонитрил:вода, 70:30 об./об.), раствор левомицетина переносят дозатором в сухие виалы и количественно определяют левомицетин методом ОФ ВЭЖХ с УФ-детектированием при длине волны 278 нм; содержание антибиотика рассчитывают при помощи градуировочного графика. Достигается повышение точности и безопасности анализа. 2 н.п. ф-лы, 1 табл., 4 ил.

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам определения антибиотика левомицетина в пищевых продуктах методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Антибиотики, в частности левомицетин (хлорамфеникол), используют в качестве эффективных противоинфекционных средств в ветеринарии и при профилактике заболеваний домашней птицы и скота. При этом антибиотик способен переходить в мясо, молоко животных, яйца птиц и другие пищевые продукты. Так как в последние годы в мире наблюдается устойчивая тенденция ужесточения требований к качеству пищевых продуктов, необходима разработка и введение в практику новых, более эффективных и чувствительных методов анализа.

Существуют различные методы определения левомицетина в пищевых продуктах (иммуноферментный анализ, химические методы (качественные реакции на данный антибиотик с различными специально подобранными реагентами), физико-химические методы (вольтамперометрия, полярография, спектрофотометрия), тонкослойная хроматография, газовая хроматография). При использовании данных методов анализа часто сталкиваются с определенными трудностями, например необходимостью использования специфических, редких и достаточно дорогостоящих реактивов; невозможностью определения сразу нескольких препаратов при совместном присутствии и неудовлетворительным нижним пределом обнаружения антибиотика; необходимостью использования предколонки (для газовой хроматографии).

Одним из наиболее перспективных методов определения антибиотика левомицетина является метод обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ ВЭЖХ), который дает возможность извлекать, разделять, идентифицировать и количественно определять лекарственные препараты в биологических жидкостях.

Известен способ количественного определения левомицетина в пищевых продуктах измерением массовой доли антибиотика методом ОФ ВЭЖХ с фотометрическим детектированием с использованием жидкостного хроматографа «Люмахром» [1]. Способ состоит в экстракции левомицетина из образца дистиллированной водой, дальнейшей очистке экстракта при помощи концентрирующего патрона ДИАПАК-C16 и в определении левомицетина методом ОФ ВЭЖХ с использованием фотометрического детектора (254 нм). Патроны ДИАПАК-С16 представляют собой корпусы из химически устойчивого полимера, заполненные высококачественными химически модифицированными сорбентами на основе силикагеля с привитыми гексадецильными группами. Способ имеет ряд недостатков: левомицетин из проб экстрагируется водой, что затрудняет дальнейший анализ, т.к. экстракты получаются достаточно загрязненными посторонними, мешающими определению антибиотика веществами; способ предполагает использование летучих и токсичных растворителей — хлороформа и гексана; определение левомицетина методом ОФ ВЭЖХ с ультрафиолетовым детектором проводят при длине волны 254 нм. Однако в этой области спектра интенсивное поглощение характерно для практически всех веществ, содержащих ароматический цикл; следовательно, известный метод определения левомицетина не гарантирует точных результатов.

Исследована возможность патронов ДИАПАК-C16 для концентрирования антибиотиков цефазолина и левомицетина из разбавленных растворов с последующим их определением методом ОФ-ВЭЖХ [2]. Сорбцию препаратов проводят в статическом и динамическом режимах, антибиотики десорбируют ацетонитрилом, полученные растворы анализируют методом ОФ ВЭЖХ с использованием подвижной фазы (ацетонитрил-вода, 50:50 об./об.); колонки Zorbax ODS C18 (15×0,46 см), рабочие длины волн — 210 и 254 нм. Однако данная методика позволяет осуществлять выделение и анализ антибиотиков из разбавленных водных растворов фармацевтических препаратов и не адаптирована для анализа пищевых продуктов с высоким содержанием жира.

Известен способ определения левомицетина в мясе краба и в креветках с помощью ВЭЖХ с масс-детектированием [3]. Антибиотик экстрагируют этилацетатом, в качестве подвижной фазы используют метанол. Недостатками данного способа являются: применение высокотоксичного метанола в качестве подвижной фазы; использование дорогостоящего и сложного в освоении жидкостного хроматографа с масс-детектором, что затрудняет широкое применение известного способа анализа.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к способу определения левомицетина в пищевых продуктах является способ извлечения антибиотиков из пищевой продукции органическими растворителями — метанолом и ацетонитрилом с последующей очисткой экстракта растворами Карреза (водный раствор Zn(СН3СОО)2 и K4[Fe(CN)6]×3H2O), после чего экстракт обрабатывают диэтиловым эфиром для удаления липидов и анализируют методом ОФ ВЭЖХ с использованием подвижной фазы (ацетонитрил:вода, 70:30 об./об.) (колонка Zorbax ODS C18 (15×0,46 см), с УФ-детектированием при 220, 254 и 273 нм) [4]. Количество антибиотика в пробе определяют с помощью градуировочного графика. Предел обнаружения антибиотика левомицетина в способе-прототипе составляет 0,9±0,2 нг в одной порции раствора, вводимой в хроматограф для анализа. Недостатками данного способа являются необходимость применения высокотоксичного реагента — метанола, а также недостаточная точность определения левомицетина вследствие частичного осаждения антибиотика на хлопьевидном осадке гексацианоферрата цинка.

Задачей заявляемого изобретения является разработка воспроизводимого, прецизионного способа выделения и концентрирования левомицетина из пищевых продуктов, а также его количественного определения.

Поставленная задача достигается тем, что левомицетин экстрагируют из пробы ацетонитрилом, отделяют на центрифуге раствор, в котором находится антибиотик, к центрифугату добавляют сорбент — вермикулит (массовое соотношение которого 0,1 г сорбента на 1 г жира в пробе) и встряхивают в течение 30 минут, затем раствор отделяют и пропускают через смесь сорбентов — активированного угля и вермикулита, взятых в массовом соотношении, равном 1:1, и промывают дистиллированной водой, элюируют левомицетин этанолом, элюат упаривают досуха на водяной бане и охлаждают до комнатной температуры, затем остаток растворяют в подвижной фазе (ацетонитрил:вода, 70:30 об./об.), раствор левомицетина переносят дозатором в сухие виалы и количественно определяют левомицетин методом ОФ ВЭЖХ с УФ-детектированием при длине волны 278 нм; содержание антибиотика рассчитывают при помощи градуировочного графика.

Поставленная задача наилучшим образом решается новыми, ранее не известными из уровня техники условиями пробоподготовки образца, а именно:

— последовательным применением сорбентов:

— вначале — вермикулита, массовое соотношение которого 0,1 г сорбента на 1 г жира в пробе;

— затем — смеси активированного угля и вермикулита при их массовом соотношении, равном 1:1;

— последующей переэкстракцией антибиотика этанолом.

В заявляемом способе используют вермикулит (природный цеолит) Кокшаровского месторождения Приморского края.

Указанные существенные отличительные признаки заявляемого изобретения обеспечивают концентрирование антибиотика, очистку экстракта от мешающих анализу компонентов, что особенно актуально при анализе пищевых продуктов с высоким (>30%) содержанием жира, и позволяют определить левомицетин известным ОФ ВЭЖХ-методом с достаточной степенью точности.

Техническим результатом предлагаемого способа определения содержания левомицетина в пищевых продуктах является повышение точности количественного определения антибиотика в пищевых продуктах с различным содержанием жира, а также снижение токсичности проведения аналитических исследований.

Способ определения содержания левомицетина в пищевых продуктах осуществляют следующим образом. Левомицетин экстрагируют из пробы ацетонитрилом и отделяют раствор, в котором находится антибиотик с примесями, от осадка (свернувшийся белок). В полученный раствор антибиотика в ацетонитриле добавляют вермикулит, массовое соотношение которого 0,1 г сорбента на 1 г жира в пробе, встряхивают колбу со смесью в течение 30 минут на встряхивателе и отделяют раствор от сорбента. Отфильтрованный раствор пропускают через смесь сорбентов (активированный уголь и вермикулит, взятых при массовом соотношении, равном 1:1), промывают дистиллированной водой и элюируют антибиотик этанолом. Элюат в круглодонных колбах упаривают досуха на водяной бане, охлаждают до комнатной температуры и растворяют в подвижной фазе (ацетонитрил:вода, 70:30 об./об.). Раствор левомицетина переносят дозатором в сухие виалы и количественно определяют антибиотик методом ОФ ВЭЖХ с УФ-детектированием при длине волны 278 нм; содержание антибиотика рассчитывают при помощи градуировочного графика.

Экспериментально установлена необходимость последовательного применения сорбентов: вначале — вермикулита для дополнительной очистки экстракта от примесей. Необходимость использования вермикулита при его массовом соотношении, равном 0,1 г сорбента на 1 г жира в пробе, подтверждена экспериментальным путем и обусловлена тем, что при статической сорбции из раствора на вермикулите происходит сорбция примесей (липиды, белки и др.), которые присутствуют в экстракте. Таким образом, достигается предварительная очистка экстракта от балластных веществ.

Для сорбции левомицетина из раствора после отделения вермикулита используется бинарный сорбент (активированный уголь и вермикулит при их массовом соотношении, равном 1:1), применение которого позволяет не только проводить доочистку экстракта от соэкстрагированных примесей, но и концентрировать левомицетин в количествах, необходимых для хроматографического анализа. Активированный уголь сорбирует примеси из раствора левомицетина в этаноле, обеспечивает получение прозрачного и пригодного для ОФ ВЭЖХ-анализа раствора левомицетина. Для того чтобы минимизировать возможность сорбции антибиотика на угле, необходимое количество активированного угля предварительно рассчитывают по формуле (1), если содержание жира в продукте ≥3,9%; и по формуле (2), если содержание жира в продукте меньше чем 3,9%:

mR — масса остатка после экстракции ацетонитрилом;

f — содержание жира в исследуемом продукте.

где mS2 — масса сорбента, необходимая для анализа пищевого продукта, с содержанием жира менее 3,9%,

f — содержание жира в исследуемом продукте.

После расчета навески активированного угля, необходимой для анализа продукта на левомицетин, готовят смесь сорбентов при их массовом соотношении, равном 1:1; такое соотношение сорбентов является оптимальным и установлено экспериментально.

Изменение соотношения активированный уголь:вермикулит приводит либо к уменьшению степени извлечения антибиотика, либо к получению мутных растворов, непригодных для анализа методом ОФ ВЭЖХ.

Элюирование левомицетина осуществляется этанолом, поскольку этот растворитель обладает достаточной полярностью для наиболее полного элюирования левомицетина с сорбента. Менее полярные растворители извлекают с сорбента и неполярные примеси, что приводит к уменьшению точности анализа антибиотика заявляемым способом. Не маловажным при выборе растворителя на стадии элюирования левомицетина является меньшая токсичность этанола по сравнению с метанолом, используемым в способе-прототипе.

Заявляемый способ впервые позволяет анализировать пищевые продукты с различным содержанием жира — от 1,0% до 60% с достаточно высокой степенью извлечения антибиотика, а именно (98,5-90)%, что подтверждается данными таблицы.

Классы МПК: G01N33/15 медицинских препаратов
Автор(ы): Илларионова Е.А. , Абрамова Л.В. , Илларионов А.И.
Патентообладатель(и): Илларионова Елена Анатольевна
Приоритеты:
Степень извлечения левомицетина из продуктов с различным содержанием жира
Исследуемый продукт Жирность исследуемого продукта, % Степень извлечения, %
Маргарин 1 60,0 88,9 89,3
Маргарин 2 40,0 91,2 90,9
Молоко 3,9 96,4 97,1
Яйца куриные 1,2 98,7 98,9

Правильность предлагаемого способа определения содержания левомицетина в пищевых продуктах подтверждена методом «введено-найдено» и экспериментальными данными (примеры 1-3); хроматограммы представлены на фигурах 1-4.

На фиг.1 представлена хроматограмма стандартного раствора левомицетина с концентрацией антибиотика 0,01 мг/мл, приготовленного из фармацевтического препарата «Хлорамфеникола натрия сукцинат», приобретенного в аптечной сети. Пик вещества со временем удерживания 2,492 мин принят за пик левомицетина.

На фиг.2 представлена хроматограмма раствора левомицетина с концентрацией 0,01 мг/мл, внесенного в пищевой продукт (растительный маргарин, жирностью 40%) и выделенного из него по заявляемому способу. Пик вещества со временем удерживания 2,429 мин принят за пик левомицетина.

На фиг.3 представлена хроматограмма раствора левомицетина, выделенного по заявляемому способу из пищевого продукта «яйцо куриное». Пик вещества со временем удерживания 2,418 мин принят за пик левомицетина.

На фиг.4 представлена хроматограмма раствора левомицетина с концентрацией 0,01 мг/мл, внесенного в пищевой продукт (растительный маргарин, жирностью 60%) и выделенного из него по заявляемому способу. Пик вещества со временем удерживания 2,437 мин принят за пик левомицетина.

Возможность осуществления заявляемого способа иллюстрируется примерами.

Пример 1. Определение левомицетина (хлорамфеникола) в яйцах куриных

В коническую колбу вместимостью 100,0 мл вносят 50 г куриных яиц, предварительно тщательно гомогенизированных в стеклянной посуде, приливают 100 мл ацетонитрила (хч) и ставят на встряхиватель на 2 часа. Полученный экстракт фильтруют через стекловату, помещенную в стеклянную воронку и промытую 5 мл ацетонитрила. В полученный раствор добавляют 1 г вермикулита. Колбу с экстрактом и сорбентом помещают на встряхиватель на 30 минут, фильтруют раствор и пропускают через бинарный сорбент — смесь 3,85 г активированного угля и 3,85 г вермикулита, после чего сорбенты промывают 10 мл дистиллированной воды. Затем левомицетин элюируют 10 мл этанола и упаривают раствор на водяной бане в круглодонной колбе досуха. Колбу охлаждают на воздухе до комнатной температуры и ополаскивают 1 мл подвижной фазы (ацетонитрил:вода, 70:30 об./об.). Раствор антибиотика в подвижной фазе собирают дозатором на 1000 мкл и переносят в сухую чистую виалу. Количество антибиотика находят методом ОФ ВЭЖХ (жидкостный хроматограф Shimadzu LC-6A с УФ-детектором, колонка Zorbax ODS C18 (15×0,46 см), подвижная фаза (ацетонитрил:вода, 70:30 об./об.) при рабочей длине волны 278 нм. Содержание левомицетина (мг/кг), рассчитанное по методу градуировочного графика составило: 0,0140±0,0011 мг/кг; степень извлечения — 98,9% (фиг.3).

Пример 2. Определение левомицетина в маргарине с жирностью 40,0%

Определение антибиотика проводили по примеру 1, но перед экстракцией 50 г маргарина растопили в колбе при температуре 55°С (достаточная температура, чтобы растопить жир, содержащийся в маргарине, и не разрушить антибиотик), добавили 1 мл раствора левомицетина с концентрацией 0,1 мг/мл. Затем, не охлаждая образец, прибавили 100 мл ацетонитрила и проводили экстракцию левомицетина на встряхивателе в течение 3 часов при температуре 50°С. В полученный раствор добавили 1 г вермикулита. Колбу с экстрактом и сорбентом помещали на встряхиватель на 30 минут, отфильтровывали раствор и пропускали через бинарный сорбент — смесь 27,0 г активированного угля и 27,0 г вермикулита. Далее — по примеру 1. Содержание левомицетина составило 0,09105 мг/кг; степень извлечения — 91% (фиг.2).

Пример 3. Определение содержания левомицетина в маргарине жирностью 60,0% Количество внесенного антибиотика такое же, как в примере 2. Время экстракции ацетонитрилом — 4 часа. Бинарный сорбент — 40,5 г активированного угля и 45,5 г вермикулита. Содержание левомицетина составило 0,0891 мг/кг; степень извлечения — 89% (фиг.4).

Экспериментально установлено, что в зависимости от содержания жира в продукте время экстракции необходимо изменять. Для продуктов с содержанием жира от 1 до 10% оно составляет 2 часа, для продуктов с содержанием жира от 10 до 40% — 3 часа, выше 40% — 4 часа. Увеличение времени экстракции более 4 часов не приводит к увеличению степени извлечения антибиотика; при времени экстракции менее 2 часов экстракция левомицетина не является полной.

Заявляемый способ выделения, концентрирования и идентификации антибиотика левомицетина (хлорамфеникола) прост, не трудоемок, не требует большого количества реактивов и может быть применен в любой химической лаборатории, где имеется жидкостный хроматограф с УФ-детектором. Погрешность измерения составляет 3-4% для концентрации до 0,01 мг/кг и 10% для больших концентраций.

1. № М 01-28-2002. «Методика выполнения измерений массовой доли левомицетина (хлорамфеникола) в продуктах животного происхождения методом ОФ ВЭЖХ с фотометрическим детектированием с использованием жидкостного хроматографа «Люмахром»». — г.Санкт-Петербург: ООО «Люмэкс», 2008.

2. Концентрирование антибиотиков цефазолина, цефотаксима и левомицетина на модифицированных кремнеземах. / Л.И.Соколова, И.В.Чучалина. // Журнал аналитической химии. — 2006. — Т.61, №12, с.1238-1242.

3. Rupp. H.S. Liquid chromatography/tandem mass spectrometry analysis of chloramphenicol in cooked crabmeat / H.S.Rupp, J.S.Stuart, J.A.Hurlbut // Journal of AOAC International. — 2005. — Vol.88, N 4. — PP.1155-1159.

4. Определение бензилпенициллина, левомицетина и тетрациклина в пищевых продуктах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. / Л.И.Соколова, А.П.Черняев. // Журнал аналитической химии. — 2001. — Т.56, №11, с.1177-1180.

1. Способ определения содержания левомицетина в пищевых продуктах, включающий экстракцию левомицетина из пробы ацетонитрилом, отделение от осадка раствора, содержащего левомицетин, очистку раствора сорбентом-вермикулитом при массовом соотношении 0,1 г сорбента на 1 г жира в пробе, доочистку раствора и концентрирование из него левомицетина при пропускании через сорбент в виде смеси активированного угля и вермикулита при их массовом соотношении 1:1, десорбцию левомицетина при элюировании этанолом, упаривание элюата с последующим растворением охлажденного остатка в подвижной фазе ацетонитрил-вода при их объемном соотношении 70:30, анализ полученного раствора методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии и расчет содержания левомицетина при помощи градуировочного графика.

2. Сорбент для осуществления способа по п.1, содержащий активированный уголь и вермикулит при их массовом соотношении, равном 1:1.

источник

Общая характеристика таблеток левомицетина; их свойства, способ получения, применение и формы выпуска. Изучение процесса валидационной оценки методик анализа данного антибиотика по показателям специфичность, линейность, прецизионность и правильность.

ГБОУ ВПО Пятигорский Медико-фармацевтический Институт

Филиал Волгоградского Государственного Медицинского Университета

Кафедра фармацевтической химии

левомицетин таблетка антибиотик валидационный

Валидационная оценка методик анализа левомицетина

Выполнила: студентка 520-группы

Гукетлова Оксана Мусабиевна

Руководитель: старший преподаватель,

Саморядова Анна Борисовна

1.5 Физические и химические методы анализа

1.6 Применение и формы выпуска

2. Валидационная оценка аналитических методик

Качество лекарственных препаратов — это показатель который зависит от множества факторов. На каждой стадии производства, будь то анализ субстанции для изготовления или проведение инструктажа персонала необходима строгая упорядоченность мероприятий по осуществлению контроля.

В данной работе внимание уделяется контролю методов анализа фармацевтической продукции — валидационной оценке аналитических методик.

Валидационная оценка аналитических методик — это экспериментальное доказательство аналитической методики.

Валидационной оценке подвергаются методы:

· Установление пределов содержания примесей

Ш Количественного определения

Основные валидационные характеристики , рассматриваемые в данной работе, это:

1. Изучение процесса валидационной оценки методик анализа лекарственных средств.

2. Установить соответствие методик анализа таблеток левомицетина по 0,25 по показателю специфичность.

3. Установить соответствие методик анализа таблеток левомицетина по 0,25 по показателю линейность.

4. Установить соответствие методик анализа таблеток левомицетина по 0,25 по показателю прецензионность.

5. Установить соответствие методик анализа таблеток левомицетина по 0,25 по показателю правильность.

6. Сделать определенные выводы на основе результатов испытаний.

Из большого числа антибиотиков, являющихся ароматическими соединениями (производными нитрофенилалкиламинов), в медицинской практике применяют хлорамфеникол, или левомицетин, обнаруженный впервые в 1947 году в культуральной жидкости актиномицета Streptomyces venezuelae. В 1949 году установлена его химическая структура и осуществлен синтез. Хлорамфеникол был первым антибиотиком, химический синтез которого внедрен в промышленном масштабе, в то время как большинство других антибиотиков получают биосинтезом. Этому в значительной степени способствовала сравнительно простая химическая структура хлорамфеникола.

Левомицетин (хлорамфеникол) -D-(-)-трео-1-n-нитрофенил-2-дихлорацетиламинопропандиол-1,3

Рисунок 1. Структурная формула хлорамфеникола

Хлорамфеникол (левомицетин) — антибиотик широкого спектра действия. Синтетическое вещество, является продуктом жизнедеятельности микроорганизма Streptomyces venezuelae. D- (-) — трео-1- параНитрофенил -2-дихлорацетиламино-пропандиол — 1,3. Синонимы: Хлороцид, Alficetin, Berlicetine, Biophenicol, Chemicetin, Chloramphenicolum, Chlornitromycin, Chlorocyclina, Chloromycetin, Chloronitrin, Chloroptic, Clobinecol, Detreomycina, Halomycetin, Leukomycin, Paraxin, Synthomycetin, Tifomycetin, Typhomycin и др. Хлорамфеникол — первый антибиотик, полученный синтетически. Применяют для лечения брюшного тифа, дизентерии и других заболеваний. Токсичен. Регистрационный номер CAS: 56-75-7.

По химическому строению хлорамфеникол представляет собой n-нитрофенил-2-дихлорацетиламинопропандиол-1,3. Молекула этого вещества включает два асиметрических атома углерода, поэтому возможно существование четырех пространственных изомеров: D-трео, L-трео, D-эритро, L-эритро, Трео- и эритро-изомеры различаются пространственным расположением функциональных групп в молекуле:

Рисунок 2. Пространственные изомеры хлорамфеникола

Оптическая активность зависит от конфигурации всех асиметрических атомов углерода, поэтому как в D-ряду, так и в L-ряду могут быть левовращающие и правовращающие изомеры.

Геометрические и оптические изомеры n-нитрофенил-2-дихлорацетиламинопропандиол-1,3 отличаются по физиологической активности. D-(- ) и L-(+)-эритро-формы представляют собой токсичные вещества и поэтому в медицине не применяются. Природный хлорамфеникол соответствует D-(-)-трео-изомеру, то есть является левовращающим изомером трео-формы. Ввиду этого он получил название левомицетин. L-(+)-трео-изомер(правовращающий антипод хлорамфеникола) неактивное вещество. Смесь D-(-) и L-(+)-трео-изомеров известна под названием синтомицина.

Белый или белый со слабым желтовато-зеленым оттенком кристаллический порошок без запаха. Температура плавления 149-1530С. Удельное вращение от +18 до +210 (5%-ный раствор в этаноле). Левомицетин мало растворим: в воде, эфире, хлороформе, растворим в этилацетате, легко растворим в этаноле.

Получают хлорамфеникол синтетическим путем, выделяя на определенных этапах синтеза необходимые изомеры. Из многочисленных исходных продуктов синтеза наиболее экономичен и доступен n-нитроацетофенон. Вначале синтезируют так называемое основание хлорамфеникола (D, L-трео-1-n-нитрофенил-2-аминопропандиол-1,3).

Рисунок 3. Получение «основания» хлорамфеникола.

Полученное «основание» разделяют на оптические антиподы последовательной кристаллизацией из водного раствора или с применением D-винной кислоты. Затем на D-(-)-трео-изомер действуют метиловым эфиром дихлоруксусной кислоты и получают хлорамфеникол:

Рисунок 4. Конечная стадия синтеза хлорамфеникола

1.5 Физические и химические методы анализа

Подлинность хлорамфеникола подтверждают по УФ-спектру 0,002%-ного водного раствора, который в области 220-400 нм имеет максимум поглощения при 278 нм и минимум при 237 нм. ФС рекомендует устанавливать величину удельного показателя поглощения при длине волны 278 нм (от 290 до 305). Водный 0,04%-ный раствор хлорамфеникола натрия сукцината в области 230-350 нм имеет один максимум поглощения при длине волны 276 нм. Для идентификации хлорамфеникола и хлорамфеникола натрия сукцината использованы вторые производные УФ-спектров поглощения, а также значения отношений оптических плотностей в максимумах и минимумах поглощения (растворители вода, этанол).

Реакция гидролиза в щелочной среде лежит в основе испытания подлинности хлорамфеникола и его производных. При нагревании в течение 1-2 мин с 15%-ным раствором гидроксида натрия хлорамфеникол и хлорамфеникола стеарат приобретают желтое окрашивание, переходящее и красно-оранжевое. В отличие от хлорамфеникола стеарата хлорамфеникол при дальнейшем нагревании в щелочной среде образует кирпично-красный осадок ациформы n-нитрофенилпропандиола-1,3. Одновременно ощущается запах аммиака. Фильтрат после подкисления азотной кислотой дает характерную реакцию на хлориды. Это позволяет подтвердить наличие в молекуле хлорамфеникола нитрофенильного радикала, аминогруппы и ковалентно связанного атома хлора, поскольку при щелочном гидролизе образуется «основание» хлорамфеникола, переходящее в аци-форму, выделяются аммиак и натриевая соль глиоксиловой кислоты:

Рисунок 5. Реакция гидролиза хлорамфеникола в щелочной среде.

Хлорамфеникол, подобно эфедрину, за счет наличия в молекуле спиртового гидроксида и вторичной алифатической аминогруппы может образовывать окрашенные комплексные соединения с солями тяжелых металлов. С раствором сульфата меди образуется синий осадок, который растворяется в н-бутаноле, окрашивая его слой в фиолетовый цвет. Известны многочисленные способы идентификации и количественного определения, основанные на предварительном гидрировании (цинковой пылью в кислой среде) нитрогруппы и молекуле хлорамфеникола до аминогруппы. Одновременно отщепляются атомы хлора:

Рисунок 6. Предварительное гидрирование цинковой пылью в кислой среде.

Образовавшийся 1-n-аминофенил-2-ацетиламинопропандиол-1,3 диазотируют и превращают в азокраситель, сочетая с в-нафтолом, б-нафтиламином или другим амином или фенолом. Например, в результате азосочетания с в-нафтолом образуется азокраситель красного цвета:

Рисунок 7. Образование азокрасителя

Для идентификации лекарственных веществ, содержащих в молекуле нитрогруппу, используют также испытание, основанное на последовательном гидрировании (цинком в хлороводородной кислоте) до ароматического амина с последующей его конденсацией с n-диметиламинобензальдегидом до образования окрашенной соли основания Шиффа. Хлорамфеникол в этих условиях приобретает ярко-оранжевое окрашивание.

Рисунок 8. Образование основания Шиффа

Наличие исходных и промежуточных продуктов синтеза в хлорамфениколе устанавливают методом ТСХ на пластинках Силуфол УФ-254 в системе хлороформ-метанол-вода (90:10:1). На хроматограмме допускается наличие не более трех посторонних пятен, каждое из которых не должно превышать пятно свидетеля по величине и интенсивности (не более 0,5% каждой примеси).

Количественное определение хлорамфеникола по ФС выполняют нитритометрическим методом после предварительного гидрирования в кислой среде цинковой пылью.

Содержание хлорамфеникола определяют и обратным бромид-броматометрическим методом. Однако этому, как и в случае нитритометрии, должна предшествовать стадия гидрирования нитрогруппы в аминогруппу с помощью цинковой пыли и хлороводородной кислоты при нагревании на кипящей водяной бане. Остаток цинка удаляют фильтрованием и к фильтрату добавляют избыток 0,1 M раствора бромата калия в присутствии бромидов. Количество непрореагировавшего титранта устанавливают с помощью йодида калия. Выделившийся йод оттитровывают 0,1 М раствором тиосульфата натрия.

Реакция образования комплексного соединения хлорамфеникола с ионом меди (II) использована для прямого титрования хлорамфеникола 0,01 М раствором сульфата меди (индикатор мурексид). Известны также аргентометрическое и меркуриметрическое определение хлорамфеникола по хлорид-иону, образующемуся после его окисления пероксидом водорода в щелочной среде. В результате этой реакции образуются две молекул хлорида натрия. Хлорид-ион можно получить и при озолении хлорамфеникола в присутствии карбонатов натрия и калия.

1.6 Применение и формы выпуска

Левомицетин антибиотик широкого спектра действия. Эффективен в отношении многих грамположительных и грамотрицательных бактерий, анаэробов, риккетсий, спирохет и некоторых крупных вирусов (возбудители трахомы, пситтакоза, пахового лимфогранулематоза и др.). Действует на штаммы бактерий, резистентные к пенициллину, стрептомицину, сульфаниламидам. Слабоактивен в отношении кислотоустойчивых бактерий, синегнойной палочки, клостридий и простейших.
В обычных дозах оказывает бактериостатическое действие. Механизм антимикробного действия связан с нарушением синтеза белков микроорганизмов.

Применяют при брюшном и сыпном тифе, паратифах, дизентерии, генерализованной форме сальмонеллеза, бруцеллезе, коклюше, туляремии, менингите, сибирской язве, риккетсиозах, газовой гангрене, абсцессах головного мозга, пневмонии, сепсисе, остеомиелите, инфекциях органов малого таза, хламидиозе. При инфекционных процессах иной этиологии, вызванных возбудителями, чувствительными к действию левомицетина, препарат показан в случае неэффективности других химиотерапевтических средств. Используют также местно для профилактики и лечения инфекционных заболеваний глаз и кожи, при наружном отите. Назначают внутрь в таблетках и капсулах (обычно за 30 мин до еды, в случае тошноты или рвоты — через час после еды), местно — в виде водных растворов и мазей. Разовая доза для взрослых 0,25-0,5 г, суточная — 2 г. В особо тяжелых случаях (брюшной тиф и др.) можно назначать препарат в дозе до 4 г в сутки (под строгим наблюдением врача и контролем за состоянием крови и функцией почек). Разовая доза для детей до 3 лет 10-15 мг/кг, от 3 до 8 лет — 0,15-0,2 г, старше 8 лет — 0,2-0,3 г; принимают 3-4 раза в сутки. Таблетки пролонгированного действия назначают только взрослым: в первые дни болезни по 1,3 г (2 таблетки) 2 раза в день, после нормализации температуры тела по 0,65 г (1 таблетка) 2 раза в день. Курс лечения 7-10 дней. По показаниям его можно продлить до 2 нед при хорошей переносимости и отсутствии изменений в кроветворной системе. Местно левомицетин применяют в виде 1-5% линимента и 0,25-5% спиртового раствора для лечения трахомы, гнойничковых поражений кожи, фурункулеза, ожогов, трещин и т. п. Повязки с линиментом назначают при гнойной раневой инфекции. При лечении конъюнктивитов, кератитов, блефаритов и трахомы используют 1% линимент или 0,25% водный раствор (глазные капли).

Ш капсулы по 0,1; 0,25 и 0,5 г;

Ш 1%; 3% и 5% спиртовые растворы для наружного применения во флаконах по 25 и 40 мл;

Ш 0,25% раствор (глазные капли) во флаконах по 5 и 10 мл;

Ш 1%; 2,5% и 5% линимент в тубах по 25 и 30 г и 2,5% — в банках по 25 и 60 г.

2. Валидационная оценка аналитических методик

Приказом Министерства здравоохранения и социального развития РФ от 30 октября 2006г. №736 принят Административный регламент Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития, который предусматривает в структуре регистрационного досье данные о валидации аналитических методик. Кроме того, в соответствии с ГОСТ Р 52249-2004 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств» (раздел 6) отдел контроля качества должен обеспечить валидацию методик контроля качества. Однако, в тоже время, данные документы не регламентируют требования к проведению валидации аналитических методик и испытания. Следует отметить, что в Российской Федерации на сегодняшний день нет собственного однозначного нормативного документа регламентирующего порядок проведения процедуры валидации. Однако, в 2007 году в Российской Федерации издано «Руководство для предприятий фармацевтической промышленности (методические рекомендации) «, которое утверждено и введено в действие решением общего собрания членов Ассоциации российских фармацевтических производителей, а также рекомендовано к использованию Федеральной службой по надзору в сфере здравоохранения и социального развития специалистам, занятым в сфере обращения лекарственных средств. Одна из частей данного руководства посвящена валидации методик анализа лекарственных средств. Официальному признанию методики анализа предшествует процедура её метрологической аттестации. В фармацевтической практике этот процесс называется валидацией, то есть экспериментальное доказательство того, что методика пригодна для решения поставленных задач. В зависимости от характера аналитической методики могут применяться те или иные валидационные характеристики (табл.1).

Таблица 1 — Валидационные характеристики основных типов методик

источник

Читайте также:  Левомицетина актитаб при поносе